Kits de détection MTT

Paramètres du produit:

Le MTT est largement utilisé pour détecter la croissance cellulaire, le principe étant que le MTT peut être réduit par la déshydrogénase dans les mitochondries des cellules vivantes pour produire une cristallisation pourpre foncé du formazan, activité que les cellules mortes n'ont pas. La cristallisation du formazan de couleur pourpre foncé, dissoute, permet de déterminer sa concentration en déterminant l'absorption de la lumière à une longueur d'onde de 490 nm et d'en déduire la viabilité cellulaire, plus la prolifération cellulaire est vigoureuse, plus l'Absorbance est élevée; Plus la Cytotoxicité est grande, plus l'Absorbance est faible.

Présentation détaillée des marchandises:

Rapport expérimental:

I. séparation et culture:

1, dans des conditions aseptiques, retirer le tissu auriculaire de rat SD d'âge 1 - 3D, puis laver ce bloc de tissu 2 fois avec du PBS, et enfin couper le tissu à environ 1 mm3 taille;

Ajouter 4 ml de digestat enzymatique (0,1% et 0,1% collagénase de type I) dans le bloc de tissu, suspendre pendant 10 s, mettre à 37 ℃ pour la digestion pendant 10 min, après quoi souffler avec un compte - gouttes pour faire une suspension unicellulaire, précipiter naturellement et recueillir le surnageant, mettre 4 ℃ après la fin de la digestion avec un milieu contenant 10% de FBS;

3, le tissu restant est ajouté 3 ~ 4 ml de digestat enzymatique, suspendu pendant 10 s, après la digestion à 37 ℃ pendant 10 min, selon la méthode ci - dessus pour recueillir le surnageant et terminer la digestion après 4 ℃ placer, répétez cette étape 2 - 3 fois jusqu'à ce que le tissu * soit digéré;

4, filtrer le digestat cellulaire avec un tamis en acier inoxydable de 200 Mesh, centrifuger à 1200r / min pendant 10 min, éliminer le surnageant, les cellules précipitées sont suspendues avec du milieu contenant 10% de FBS dmem / F12, ensemencées dans des flacons de culture de 25 cm 2, placés à 37 ° C, incubés Dans un incubateur à 5% de CO2;

5, après l'application différentielle de la paroi 1H, le milieu de culture est aspiré et la culture continue comme l'expérience nécessite l'ensemencement dans une plaque de 6 puits;

II. Identification par immunofluorescence:

1, à la croissance des myocytes auriculaires à 80% de fusion, le milieu de culture est abandonné et les cellules sont rincées 2 fois avec du PBS incubé pendant 10 min, puis les cellules sont fixées avec du paraformaldéhyde à 4% pendant 15 min à température ambiante;

2, PBS rincer les cellules 2 fois pendant 10 min, puis à 4 ° c Avec 0,1% Triton X - 100 perméable pendant 15 min;

3, PBS rincer les cellules 2 fois, chaque fois pendant 10 min, puis dans des conditions de température ambiante, fermer les cellules avec BSA 4% pendant 30 min;

4, diluer alpha - Actin un anti dans un rapport de 1: 100, puis placez - le dans un réfrigérateur à 4 ° C pour incuber les cellules pendant la nuit;

5, PBS rincer les cellules 3 fois, chaque fois pendant 10 min, diluer le bis - anti - alpha - actine dans un rapport de 1: 150, 37 ℃ condition de laisser 1 h;

6, rincer 3 fois avec du PBS pendant 10 min, et enfin observer l'image sous un microscope à fluorescence inversé et prendre des photos.

Étapes de l'opération de culture:

1. Retirez les lamelles de l'éthanol à 75% avec une pince à épiler, essuyez - les avec un chiffon de soie stérile et n'utilisez pas de gaze;

2. Placez délicatement les lamelles dans une plaque de culture à 6 puits (une pièce par puits) ou dans une boîte de pétri (2 - 3 pièces peuvent être placées dans chaque boîte plate);

3. Irradiation pendant 2 - 3 heures à 20 - 30 cm de la portée directe de la lampe UV;

4. Déplacer la suspension cellulaire comptée dans la plaque de culture de sorte que les lamelles * soient immergées dans le liquide de culture;

5. Incuber la plaque de culture à 37 ℃ dans un incubateur de bain d'eau de CO2 de 5% pendant 2 - 3 jours, lorsque les cellules collées se développent pour couvrir 2 / 3 de la surface du fond de la plaque de culture, retirer la plaque de culture, retirer délicatement la lamelle avec une pince à couvercle, après rinçage à l'eau distillée peut être rapidement fixé ainsi que le test immunocytochimique.

Points expérimentaux et description:

1. Cette méthode s'applique à la culture de cellules plaquées et non à la culture de cellules en suspension, qui peut être utilisée par la méthode de la goutte à goutte;

2. Les lamelles utilisées doivent être en verre de haute qualité et traitées avec une lotion à l'acide chromique;

3. La lame est très mince et fragile, l'action est légère lors de la prise et de la mise en place de la lame;

4. Si plus de cellules de croissance constante sont nécessaires, des boîtes de pétri plus grandes peuvent être utilisées, mais ne doivent pas être surdimensionnées pour éviter le gaspillage et augmenter le risque de contamination;

5. Si la capacité de croissance de la paroi cellulaire est mauvaise, les lamelles peuvent être trempées dans une solution de polylysine à 0,5% pendant 5 à 10 minutes et séchées naturellement.

Points opérationnels:

1) Préchauffer le milieu dans un bain - Marie à 37 ° C; Préparer un tube à centrifuger stérile de 15 ml et ajouter 8 ml de milieu préchauffé.

2) retirez les cellules de lyophilisation du réservoir d'azote liquide, mettez - les rapidement dans un bain - Marie 37 ℃ et réchauffez - les (un bécher propre peut être préparé, rempli d'eau 37 ℃, le lyophilisateur cellulaire est retiré et rapidement mis dans le bécher, puis transféré progressivement dans un bain - Marie). Agiter doucement le tube de congélation de sorte que les cellules peuvent décongeler dans 1 ~ 2MIN *, de sorte que les cellules peuvent passer la Section de température la plus vulnérable (- 5 ~ 0 ℃) dès que possible. Notez que l'orifice du tube de congélation ne peut pas sauter dans l'eau, BRL (cellules du foie de rat) pour éviter de causer la contamination.

3) essuyez le lyophilisateur avec de l'alcool à 75% avant de le placer dans une table ultra - propre, Transférez les cellules à l'intérieur du tube à l'intérieur du tube de centrifugation préparé, soufflez doucement le liquide pour que les cellules se dispersent uniformément, réduisez la concentration en DMSO et évitez de créer des bulles d'air lors du soufflage. Laver la paroi du tube 2 fois avec du milieu frais, tous transférés à l'intérieur du tube de centrifugation.

4) centrifuger à 800 RPM pendant 5 min, abandonner le surnageant, ajouter du milieu frais et souffler pour faire une suspension cellulaire.

5) Transférez la suspension cellulaire à l'intérieur du flacon de cellules t25, Complétez avec la bonne quantité de milieu, agitez doucement le flacon de cellules pour que les cellules soient distribuées uniformément et mettez - le dans un incubateur pour la culture.

6) Observez la croissance de la paroi cellulaire le lendemain, changez le milieu frais pour éliminer les cellules mortes. Continuer la culture, à la croissance des cellules à 80 ~ 90% de confluence lorsque le passage normal. Généralement, les cellules fraîchement réanimées doivent passer par 2 à 3 passages, et la viabilité cellulaire est rétablie avant d'effectuer des expériences ultérieures.

Anticorps inhibiteurs de l'enzyme de conversion de l'angiotensine 1

Anticorps antagonistes du facteur de transcription apoptotique

Alpha - 1 anti - pancréatique

ATP Binding Protein famille 6 anticorps

Adénosine triphosphate Binding Box sous - famille G1 anticorps

Adiponectine receptor 2 anticorps

Anticorps contre la protéine angel1

Anticorps contre la protéine angel2

Ankle2 Protein anticorps

Anticorps anti - ankyloïde testiculaire spécifique 1

Anticorps anchorin repeat Domain Protein 13b

Anticorps Anchor Protein repeat Domain Protein 20a1

Anticorps anchorin repeat Domain Protein 20a3

Anchor Protein repeat Domain Protein 22 anticorps

Anticorps Anchor Protein repeat Domain Protein 50

BC - 020 (cellules de cancer du sein humain) 5 × 106 cellules / bouteille × 2

BC - 021 (cellules de cancer du sein humain) 5 × 106 cellules / bouteille × 2

BC - 022 (cellules de cancer du sein humain) 5 × 106 cellules / bouteille × 2

Be (2) - m17 (cellules de neuroblastome humain) 5 × 106 cellules / flacon × 2

BGC - 803 (cellules cancéreuses de l'estomac humain) 5 × 106 cellules / bouteille × 2

C918 (cellules de mélanome choroïde de l'œil humain) 5 × 106 cellules / bouteille × 2

Cal - 27 (cellules humaines de carcinome épidermique de la langue) 5 × 106 cellules / bouteille × 2

LS 180 (cellules adénocarcinomes du côlon humain) 5 × 106 cellules / flacon × 2

CNE - 2Z (cellules cancéreuses nasopharyngées humaines) 5 × 106 cellules / flacon × 2

Kits de détection MTTColo 201 (cellules d'adénocarcinome colorectal humain) 5 × 106 cellules / flacon × 2

CW - 2 (cellules cancéreuses du côlon humain) 5 × 106 cellules / bouteille × 2

CRT (cellules de gliome humain) 5 × 106 cellules / bouteille × 2

D283 med (cellules humaines de médulloblastome) 5 × 106 cellules / flacon × 2

Ea.hy926 (cellules de fusion de cellules veineuses ombilicales humaines) 5 × 106 cellules / flacon × 2

ECV - 304 (cellules endothéliales veineuses ombilicales humaines) 5 × 106 cellules / flacon × 2

EJ (cellules cancéreuses de la vessie humaine) 5 × 106 cellules / bouteille × 2

H - 97 (cellules humaines de cancer du foie à métastases élevées) 5 × 106 cellules / flacon × 2