Kits de détection de prolifération cellulaire et de Cytotoxicité MTS

Nom chinois:Kits de détection de prolifération cellulaire et de Cytotoxicité MTS

Étiquette: MTS cell Prevention and cytotoxicity Detection Kit

Spécifications du produit: 500 fois
Numéro de l'article: BJ - 01x6321

Le MTS est un nouveau composé méthyl臜 et le MTT est un dérivé azoté tétrazolique. Le MTS peut être dégradé par la déshydrogénase mitochondriale dans les cellules vivantes pour produire du méthyl - 臜 soluble dans l'eau brun - jaune, ce qui permet de déterminer la prolifération cellulaire en déterminant l'absorption spectrale du méthyl - 臜.

Code opératoire de culture cellulaire:
Préparation du milieu de culture et des conditions de congélation:
1) Préparer le milieu F - 12k; Sérum de veau foetal de haute qualité, 10%; Double résistance, 1%.
2) conditions de culture: phase gazeuse: air, 95%; CO2, 5%. Température: 37 ℃, l'humidité de l'incubateur est de 70% - 80%.
3) lyophilisat: 90% sérum, 10% DMSO, maintenant utilisé avec un dosage actuel.
II. Traitement cellulaire:
1) réanimer les cellules: Placez rapidement le lyophilisateur contenant 1 ml de suspension cellulaire dans un bain - Marie à 37 ° C (la surface de l'eau doit être inférieure au couvercle du lyophilisateur) secouez et décongelez, déplacez - le dans un tube à centrifuger de 15 ml préparé au préalable contenant 4 ml de milieu de culture et mélangez bien. Centrifuger 4 min à 1000 RPM, éliminer le surnageant et bien souffler après addition de 1 ml de milieu. Toutes les suspensions cellulaires sont ensuite transférées pour culture dans des flacons de culture contenant 5 ml de milieu pendant une nuit. Changez de liquide le lendemain et vérifiez la densité cellulaire.
2) Passage cellulaire: si la densité cellulaire atteint 80% - 90%, la culture de passage peut être effectuée.

Méthodes de culture cellulaire:
1, passage cellulaire: peut être transmis lorsque la densité cellulaire atteint 80 - 90%
① jeter la culture et nettoyer 1 - 2 fois avec du PBS ou de la saumure physiologique;
② ajouter 2 ml 0,25% (bouteille t25), de sorte que la bouteille entière ou la boîte est couverte, le couvercle est bien placé dans l'incubateur pour la digestion;
③ 1 - 2 min après, observer les cellules au microscope, si la plupart des cellules se rétractent et il y a une petite quantité de cellules qui tombent, souffler doucement pour confirmer la digestion après l'ajout de * milieu de culture pour terminer la digestion; Si les cellules sont encore collées, remettez - les dans l'incubateur pour poursuivre la digestion jusqu'à ce qu'elles puissent être légèrement soufflées;
④ centrifuger la suspension cellulaire à environ 1000 RPM pendant 4 min, défausser;
⑤ ajouter dans un flacon ou une boîte de pétri après remise en suspension avec du milieu frais, flacon t25 avec 6 - 8 ml de milieu;
⑥ les cellules en suspension sont collectées par centrifugation directe et les cellules sont remises en suspension après précipitation dans des flacons de nouvelle culture.
2, réanimation cellulaire:
① faire fondre le lyophilisateur sous agitation rapide dans de l'eau tiède à 37 ℃, le temps est d'environ 1 min, ajouter 4 - 5 ml de milieu de culture et mélanger.
② centrifuger pendant 4 min à environ 1000 RPM, abandonner le surnageant, ajouter 1 - 2 ml de milieu de culture pour bien souffler, ajouter la suspension cellulaire dans le flacon de culture, compléter avec la quantité appropriée de milieu de culture.
3, lyophilisation cellulaire: la lyophilisation cellulaire est effectuée lorsque l'état de croissance cellulaire est bon
① jeter la culture pour le surnageant, laver 1 - 2 fois avec du PBS ou de la saumure physiologique, ajouter 1 mL 0,25% (flacon t25)
② après 1 - 2 min, les cellules sont observées au microscope, la plupart des cellules se rétractent et il y a une petite quantité de cellules qui tombent, après avoir soufflé doucement pour confirmer la digestion, ajouter * milieu de culture pour terminer la digestion;
③ centrifuger la suspension cellulaire à environ 1000 RPM pendant 4 min, abandonner le surnageant, ajouter 1 ml de lyophilisat pour remettre les cellules en suspension;
④ mettez le tube de congélation dans la boîte de refroidissement du programme, mettez - le dans le réfrigérateur à - 80 ℃, après 4 heures, Transférez le tube de congélation dans le réservoir d'azote liquide pour le stockage.

Tm3 (cellules interstitielles testiculaires de souris) 5 × 106 cellules / bouteille × 2

Tscca (cellules humaines de carcinome squameux de la langue) 5 × 106cells / Bottle × 2

U - 2 os (cellules d'ostéosarcome humain) 5 × 106 cellules / bouteille × 2

U251 (cellules de gliome humain) 5 × 106 cellules / bouteille × 2

U - 87 Mg (cellules de gliome humain) 5 × 106 cellules / flacon × 2

U - 937 (cellules de lymphome tissulaire humain) 5 × 106 cellules / flacon × 2

V79 (cellules pulmonaires de hamster) 5 × 106 cellules / bouteille × 2

Vcap (cellules cancéreuses de la prostate humaine) 5 × 106 cellules / bouteille × 2

Vero (cellules rénales de singe vert africain) 5 × 106cells / Bottle × 2

Wi - 38 (cellules pulmonaires embryonnaires humaines) 5 × 106 cellules / bouteille × 2

Wish (cellules amniotiques humaines) 5 × 106cells / bouteille × 2

Y1 (y - 1) (cellules corticales surrénales de souris) 5 × 106 cellules / flacon × 2

YAC - 1 (cellules de lymphome de souris) 5 × 106 cellules / flacon × 2

Zr - 75 - 1 (cellules de cancer du sein humain) 5 × 106 cellules / bouteille × 2

Zr - 75 - 30 (cellules de cancer du sein humain) 5 × 106 cellules / bouteille × 2

16HBE (cellules épithéliales bronchiques humaines) 5 × 106 cellules / flacon × 2

801 - D (cellules humaines de cancer du poumon à cellules géantes) 5 × 106 cellules / flacon × 2

A2 (cellules cancéreuses kystiques adénoïdes humaines) 5 × 106 cellules / flacon × 2

A - 427 (cellules cancéreuses du poumon humain) 5 × 106 cellules / bouteille × 2

A - 498 (cellules de cancer du rein humain) 5 × 106 cellules / bouteille × 2

A875 (cellules de mélanome humain) 5 × 106 cellules / bouteille × 2

Alpha / bêta - hydrolase pulmonaire Protein 3 anticorps

Adénosine triphosphate Binding Cassette transporteur f sous - Unité 3 anticorps

Adénosine triphosphate Binding Cassette transporteur a sous - Unité 5 anticorps

Anticorps contre la protéine adck1

Acyl Binding Domain Protein 4 anticorps

Alpha / Beta hydrolase 4 anticorps

Anticorps contre la protéine adck2

Acétaldéhyde déshydrogénase 16 Family A1 anticorps

Molécules d'adhésion IgG - like Domain Protein 3 anticorps

éthanol déshydrogénase 1 anticorps

δaminoacétylpropionate déshydratase anticorps

Protéines associées à la sclérose latérale musculaire 4 anticorps

Alpha 2 macroglobuline anticorps

Anticorps contre la protéine accsl

Anticorps alpha - foetoprotéine

Beta - amyloïde Precursor Protein Binding Protein 3 anticorps

Star Actin anticorps

Protéines associées au lupus érythémateux systémique trex1 anticorps

Anticorps phosphorylé systémique lupus érythémateux Precursor Protein trex1

Anticorps trex1, protéine associée au lupus érythémateux systémique phosphorylé

Kits de détection de prolifération cellulaire et de Cytotoxicité MTSAnticorps Head related Protein Complex ap - 2 μchain 1

Complexe protéique associé au joint phosphorylé ap - 2 μchain 1 anticorps

Membrane adhesine 7 anticorps

Discipline opérationnelle
1, dans une plaque de 96 puits pour ajouter des cellules de 100 μl / puits, généralement des expériences de prolifération cellulaire ajouter 100 microlitres de 2 000 cellules par puits, des expériences de Cytotoxicité ajouter 100 microlitres de 5 000 à 10 000 cellules par puits (le nombre exact de cellules utilisées par puits, selon la taille des cellules, la vitesse de prolifération cellulaire rapide et lente, etc.). Incuber dans un incubateur de cellules à 5% de CO2 à 37 ° C pendant 24 heures.
2... Une concentration appropriée de 0 à 10 µl du composé à tester est ajoutée.
Incuber les plaques 96 puits dans un incubateur cellulaire à 37 ° C avec 5% d'air CO2 et 100% d'humidité pendant le temps approprié.
4, diluer 5 x MTT avec une dilution dans une solution 1 x MTT.
5, ajouter 50 µl d'une solution de MTT 1x par puits, incuber à 37 ° C pendant 4 heures pour réduire le MTT en méthoxy.
6, aspirer le surnageant, ajouter 150 UL de DMSO par puits pour dissoudre le Formol 臜, bien agiter avec un shaker à plaques.
7, l'échelle enzymatique détecte la densité optique de chaque puits à une longueur d'onde de 570 nm (si aucun filtre de 570 nm, un filtre de 560 à 600 nm peut être utilisé).
8. Analyse des résultats
a、 Survie des cellules: la valeur de do de chaque puits testé est diminuée de la valeur de do de fond (* milieu de culture plus MTT, sans cellules) ou de la valeur de do de puits de médicament vierge (* milieu de culture plus différentes dilutions du médicament testé plus MTT, sans cellules), la valeur de Do de chaque puits répété étant prise en moyenne ± SD. La survie des cellules est exprimée en T / C%, t étant la valeur de do de la cellule doseuse et c La valeur de do de la cellule témoin. Survie cellulaire% = (do des cellules dosées / do des cellules témoins) × 100
b、 Déterminer la concentration du médicament à T / C = 50% (IC50) et la concentration du médicament à T / C = 10% (ic90)