Kits d'extraction et de purification d'acides nucléiques marques

Caractéristiques avantage:

1.Spécificité: les amorces utilisées pour tous les produits sont soumises à une analyse bioinformatique exhaustive, aprèsGenBankEt l'alignement de vastes bases de données auto - construites pour s'assurer que chaque amorce utilisée est un segment de séquence génétique spécifique à un genre ou à un sérotype, permettant une détection spécifique des genres et des sérotypes bactériens, la spécificité est atteinteBon - Oui.

2.Reproductibilité: tous les produits de la gamme ont été validés par un grand nombre de souches expérimentales et la reproductibilité estBon - Oui.

3.Sensibilité: cette gamme de produits permet une détection très sensible des bactéries détectées lorsque la concentration de bactéries dans l'échantillon atteint103cfu/mlLorsque, sa détection directe peut être réalisée sans processus de bactériophilisation fastidieux.

4.Utilité: large gamme de détection, couvrant les risques les plus graves pour le corps humain17Bactéries pathogènes respiratoires et intestinales, permettant une détection rapide des échantillons cliniques et d'autres échantillons environnementaux, l'ensemble du processus de détection est3 - 4Une heure.

5.Avantages1: riche en ressources séquentielles, exceptéGenBankEn plus des séquences publiées, la société a également effectué le déchiffrement de séquence d'un grand nombre de souches, garantissant théoriquement une bonne conservation et spécificité des amorces sélectionnées.

6.Avantages2: Cette série de kits a fait l'objet d'un grand nombre d'expériences de conservation et de spécificité, et grâce à la richesse des ressources en souches de la société, chaque kit de test a été testé20Vérification de la conservation des autres souches standard et cliniques et40La vérification de la spécificité des autres souches standard proches et cliniques garantit qu'aucun résultat faussement positif ou faussement négatif n'est signalé pendant l'utilisation.

Extraction de l'ARN et de l'ADN:

Craquage: la formule de craquage peut être due au fait que vous souhaitez extraire L'ADN ou l'ARN varient, mais le dénominateur commun est un tampon de lyse contenant des concentrations élevées de sels ionisés.

Effets des chaotropes: les chaotropes perturbent les liaisons hydrogène et les interactions hydrophobes. Les sels liquides comprennent le chlorhydrate de Guanidine, le Thiocyanate de Guanidine, l'urée et le Perchlorate de lithium.

Détergents: en plus de l'agent de dissociation, il y a souvent un peu de détergent dans le tampon de lyse pour aider à la dissolution et à la lyse des protéines.

溶JuinEnzyme et protéase K: selon le type d'échantillon, le clivage peut également être effectué à l'aide d'enzymes. La protéase K est l'une d'entre elles et fonctionne en fait mieux dans ces tampons de dénaturation; Lorsque la dénaturation des protéines augmente, l'action de la protéase K est également augmentée en conséquence. Cependant, solubleJuinLes enzymes ne jouent aucun rôle dans la dégénérescence et sont donc solublesJuinLe traitement enzymatique est généralement effectué avant l'addition du sel dénaturé.

Étapes d'extraction:

1. Retirez l'échantillon du réfrigérateur négatif quatre - vingts et placez - le sur la glace pour décongeler lentement; (centrifugeuse pré - refroidie à 4 degrés à l'avance)

2. Après décongélation (rouge), ajouter 200 μl de chloroforme (le volume de chloroforme ajouté est de 1 / 5 du volume de trizol), une forte commotion (rouge crème) et laisser reposer sur la glace pendant 10 min. (le chloroforme est un solvant organique, efficace pour séparer rapidement les phases organique et inorganique. Dans la phase organique, ce sont principalement les Phénols et les protéines qui se lient, de sorte que les protéines et l'ARN se détachent et l'ARN passe dans la phase aqueuse. ) et

3. Placer dans une centrifugeuse pré - refroidie, centrifuger (4 degrés, 12 000 tr / min, 15 min), après centrifugation visible en trois couches distinctes (la phase aqueuse limpide incolore supérieure est une couche d'ARN, le blanc laiteux très mince au milieu est une couche d'ADN et la couche inférieure est rouge est une couche de protéines).

4. Soigneusement aspirer lentement le surnageant, environ 400 μl (préférez moins ou pas plus), placer dans un nouveau tube RNase - free EP de 1,5 ML, ajouter un volume égal d'Isopropanol, mélanger à l'envers et laisser reposer à température normale pendant 15 minutes.

5. Centrifugation (4 degrés, 12000 RPM, 15 min), précipité blanc visible (parfois moins de cellules ne peuvent pas voir le précipité, peut être laissé négatif vingt ou négatif quatre - vingt - deux heures avant de poursuivre les étapes ultérieures)

Défaussez le mélange, ajoutez 950 UL d'éthanol à 75% par tube et mélangez à l'envers (n'oubliez pas de souffler le mélange avec un pistolet, cela provoquera la dissolution de l'ARN).

7. Centrifuger (4 degrés, 12000 RPM, 10 min), précipité blanc clair sur le fond visible.

8. Après centrifugation, défausser le nettoyage, mettre dans la centrifugeuse à nouveau momentané, laver le liquide résiduel avec une pipette de 10 μl, laisser sécher le couvercle ouvert (environ 5 min).

9. Chaque échantillon selon la taille de précipitation ajouter la bonne quantité d'eau DEPC (généralement 20 ~ 30 μl, parfois pas de précipitation visible, peut ajouter 10 μl de dissolution de l'eau DEPC), souffler l'ARN dissous, onze étages Enzyme mesure la concentration, valeur od (260 / 280 = 1,8 - 2,0) marqueur, moins quatre - vingts préservation.

Remarques: pour l'extraction de neutrophilesL'ARN recommande un nombre de cellules supérieur à 2x106 / échantillon;

Remarque: porter un masque pendant le fonctionnement.

Les amorces de conception doivent suivre les principes suivants:
① longueur de l'amorce: 15 - 30bp, généralement autour de 20bp.
② intervalle d'amplification de l'amorce: 200 - 500 pb est approprié, les fragments peuvent être étendus à 10 KB dans des conditions spécifiques.
③ base d'amorce: la teneur en G + c est appropriée à 40 - 60%, trop peu d'amplification de G + C n'est pas efficace, trop de G + c est susceptible d'apparaître des bandes non spécifiques. L'atgc est bien distribué au hasard, en évitant l'arrangement en chaîne de plus de 5 nucléotides purine ou Pyrimidine.
④ éviter l'apparition de structures secondaires à l'intérieur de l'amorce et éviter la complémentarité entre les deux amorces, en particulier à l'extrémité 3 ', qui formerait autrement un dimère d'amorce donnant lieu à des bandes amplifiées non spécifiques.
⑤ les bases à l'extrémité 3 'de l'amorce, en particulier les bases terminales et inverses, doivent être strictement appariées pour éviter l'échec de la PCR en raison de l'absence d'appariement des bases terminales.
⑥ il y a ou peut être ajouté un site de coupure enzymatique approprié dans l'amorce et la séquence cible amplifiée a un site de coupure enzymatique approprié, ce qui est excellent pour l'analyse de coupure enzymatique ou le clonage moléculaire.
⑦ spécificité des amorces: les amorces ne doivent pas présenter d'homologie apparente avec les autres séquences de la base de données des séquences d'acides nucléiques.

PrécautionsPour:

1. Le kit doit être retiré de l'environnement réfrigéré et peut être utilisé après 15 - 30 minutes d'équilibre de la température ambiante, si le paquet d'enzyme standard n'est pas utilisé après l'ouverture de la plaque, les lattes doivent être emballées dans un sac scellé pour la conservation. Le liquide de lavage concentré peut avoir un dégagement cristallin, dilué peut être chauffé dans un bain - Marie pour aider à la dissolution, le lavage n'affecte pas le résultat.

2. L'éprouvette doit être utilisée pour chaque étape d'échantillonnage et sa précision doit être fréquemment corrigée pour éviter les erreurs d'essai. Le temps d'un prélèvement est contrôlé en 5 minutes, si le nombre de spécimens est élevé, un prélèvement au pistolet est recommandé.

3. Veuillez faire la courbe standard en même temps que chaque détermination，Faire un trou de pore. Si la teneur en matière à mesurer est trop élevée dans un spécimen (échantillonValeur od supérieure à la valeur od d'un trou standard di), s'il vous plaît diluer un certain multiple (n fois) avec la dilution de l'échantillon avant de le déterminer, lors du calcul, s'il vous plaîtencoreMultiplier par le multiple de dilution total (x n x 5).

4. Le film de scellement est limité à un usage unique pour éviter la contamination croisée.

5. Substrat s'il vous plaît garder à l'abri de la lumière.

6. Strictement selon le fonctionnement des instructions, le résultat de l'essai doit être déterminé par la lecture de l'étalon enzymatique.

7. Tous les échantillons, les liquides de lavage et tous les types de déchets doivent être éliminés selon les matières infectieuses.

8. Les composants des différents numéros de lot de ce réactif ne doivent pas être mélangés.

9. Les produits périmés ne peuvent pas être utilisés.

10. En cas de différence avec les instructions en anglais, les instructions en anglais prévaudront.