I. réanimation cellulaire

Après avoir retiré les cellules conservées congelées de l'azote liquide, aprèsL'agitation constante à l'intérieur de la chaudière de bain d'eau 37C favorise sa fonte. Pipette dans un tube à centrifuger de 15 ml, ajouter 10 m de milieu dmem préchauffé et souffler doucement

Bien, centrifuger,2000rpmX2min， Jeter le surnageant.

rejoindreLe milieu 10midmem est lavé et le surnageant éliminé. Ajouter le milieu 10midmem, souffler doucement, ensemencer dans des disques de 10 cm, incuber dans un incubateur de cellules contenant 5% de CO 2Nourrir.

II. Transmission cellulaire

Densité cellulaire atteinteÀ 80% ~ 90%, décanter le milieu, 10mipbs nettoyé 2 fois. Ajouter 3 mi contenant 0,25% d'EDTA et placer l'incubateur de cellules humaines pendant 3 min. Personne supplémentaire 1midmem

Le milieu termine la digestion, transfert àTube à centrifuger de 15 ml.

rejoindre10mipbs Lavez le disque de culture cellulaire, Transférez dans un tube à centrifuger de 15 ml, 2000rpmx2min, défaussez le surnageant. Ajouter à nouveau 10mipbs (autoclavé, conservé à 40c), souffler

Bien, suce.10 µl sont comptés, ensemencés selon 1x10 6 / disque, la culture étant poursuivie dans un incubateur cellulaire contenant 5% de CO 2.

Iii. Gel cellulaire

Densité cellulaire atteinteÀ 80% ~ 90%, décanter le milieu, 10mipbs nettoyé 2 fois. Ajouter 3 mL contenant 0,25% d'EDTA et placer l'incubateur de cellules humaines pendant 3 min. Rejoignez imidmem

Le milieu termine la digestion, transfert àTube à centrifuger de 15 ml. Ajouter 10 mipbs pour nettoyer le disque de culture cellulaire, transférer dans un tube à centrifuger de 15 ml, 2000 rpmx2 min, défausser le surnageant.

rejoindreIML lyophilisat (90% sérum, 10% DMSO), mis à l'intérieur de la boîte de lyophilisation (avec de l'alcool isopropylique à l'intérieur de la boîte pour garantir la vitesse de diminution de la température), immédiatement mis à l'intérieur d'un réfrigérateur 80C, pendant la nuit,

Mis dans l'azote liquide le lendemain, il peut être conservé pendant au moins deux ans, si l'azote liquide humain n'est pas libéré, il peut être conservé pendant trois mois.

Formulation du lyophilisat:70% de milieu + 20% FBS + 10% dmso.dmso pour ajouter lentement goutte à goutte, agiter en goutte à goutte.

Lors de l'entrée dans les cellules intercellulaires pour commencer la culture cellulaire, il est nécessaire de suivre strictement les étapes suivantes:

① déterminez que toutes les solutions de fonctionnement cellulaire et les consommables ont été stérilisés et testés sans problème, solution incertaine et les consommables ne pas utiliser, sauf dans des circonstances exceptionnelles, ne pas emprunter la solution de quelqu'un d'autre

Liquide.

② assurez - vous que les poignets du vêtement ont été retroussés ou que les poignets de la blouse ont été serrés.

Lors de l'entrée dans les cellules intercellulaires pour commencer la culture cellulaire, il est nécessaire de suivre strictement les étapes suivantes:

① déterminez que toutes les solutions de fonctionnement cellulaire et les consommables ont été stérilisés et testés sans problème, solution incertaine et les consommables ne pas utiliser, sauf dans des circonstances exceptionnelles, ne pas emprunter la solution de quelqu'un d'autre

Liquide.

② assurez - vous que les poignets du vêtement ont été retroussés ou que les poignets de la blouse ont été serrés.

③ déterminer la quantité d'alcool à l'intérieur de la lampe à alcool, si nécessaire pour compléter à temps.

④ assurez - vous que toutes les solutions et consommables nécessaires sont à portée de main. Pour faciliter l'ouverture des bouchons d'une seule main, l'expérience peut commencer à dévisser tous les bouchons.

③ essayez de ne pas verser la solution directement à moins que l'embouchure de la bouteille ne soit pas brûlée. Si le déversement échoue et que la solution colle à l'embouchure de la bouteille, nettoyez soigneusement le pourtour de l'embouchure de la bouteille avec une serviette en papier pulvérisée à 75% d'alcool (ne pas attraper).

Toucher l'embouchure de la bouteille) après avoir simplement brûlé sur la flamme.

S'il n'est pas certain que les consommables utilisés sont propres lors de l'opération, ils doivent être remplacés à temps.

L'expérience est emballée à temps, garder la zone de travail propre et bien rangé, après utilisation75%L'alcool nettoie les comptoirs.