Kits ELISALe test d'immunoadsorption enzymatique (ELISA) par la méthode sandwich en une étape à deux anticorps est utilisé. Les paquets d'anticorps pré - emballés par coccidiococcus (SF) ont été placés dans des micropores, puis des échantillons, des étalons, des anticorps de détection marqués HRP ont été ajoutés, puis lavés par incubation. La couleur est révélée par le substrat TMB qui se transforme en bleu sous la catalyse de la peroxydase et en jaune * final sous l'action de l'acide. La nuance de couleur et la coccidiose (SF) dans l'échantillon étaient positivement corrélées. La concentration de l'échantillon a été calculée en déterminant l'Absorbance (valeur OD) à une longueur d'onde de 450 nm à l'aide d'un étalon enzymatique.

Étapes de fonctionnement du kit de détection ELISA:

1. Équilibré à partir de la température ambianteRetirez les lamelles nécessaires dans le sac de papier d'aluminium après 20min, les lamelles restantes sont remises à 4 ° C scellées avec un sac auto - scellé.

2. Placez le trou standard et le trou d'échantillon, chaque trou standard plus 50 μl de standard avec différentes concentrations;

3. Puits d'échantillon d'abord ajouter l'échantillon à tester 10 μl, puis la dilution de l'échantillon 40 μl; Les trous vides ne sont pas ajoutés.

4. À l'exception des puits vides, 100 μl d'anticorps de détection marqués à la peroxydase de raifort (HRP) ont été ajoutés dans chaque puits dans les puits standard et les puits d'échantillon, les puits réactionnels ont été fermés avec une membrane de plaque de scellement et incubés dans un bain - Marie à 37 ℃ ou un incubateur pendant 60 min.

5. Vider le liquide, le papier absorbant pour sécher, chaque trou est rempli de liquide de lavage, laisser reposer 1 min, jeter le liquide de lavage, le papier absorbant pour sécher, ainsi répéter le lavage de la plaque 5 fois (peut également laver la plaque à la machine).

6. Ajouter les substrats a, B 50 μl chacun par puits, 37 ℃ incuber à l'abri de la lumière pendant 15 min.

7. Ajouter 50 μl de liquide de terminaison par puits pendant 15 min, la valeur de do de chaque puits est déterminée à une longueur d'onde de 450 nm.

ELISA test kit manipulation et conservation:

Capable d'appliquerLes échantillons de kits de test ELISA sont nombreux, il y a du sérum, du plasma, du surnageant cellulaire, du lysat cellulaire, de l'urine, du liquide synovial articulaire, du liquide céphalo - rachidien, du liquide d'irrigation alvéolaire, des homogénats de tissus de divers tissus; Ni l'acquisition ni le traitement ne sont effectués de la même manière. On trouvera ci - après une liste des modalités de collecte, de traitement et de conservation des échantillons prélevés dans les kits ELISA.