Spécifications 48T Glucagon (GC) Kit humain

Spécifications 48T Glucagon (GC) Kit humain
Introduction
Le Glucagon (GC) est également appelé Glucagon ou anti - insuline ou insuline B. c'est une hormone qui accompagne la sécrétion de l'insuline par les cellules Alpha des îlots du pancréas des vertébrés. Contre l'insuline, joue un rôle dans l'augmentation de la glycémie. Le Glucagon passe par le système Camp - PK, qui active la phosphatase des hépatocytes et accélère la dégradation du Glycogène. L'augmentation de la gluconéogenèse est due au fait que les hormones accélèrent l'entrée des acides aminés dans les cellules du foie et activent les lignées enzymatiques impliquées dans le processus de gluconéogenèse. Le Glucagon active également la lipase, ce qui favorise la lipolyse, tout en renforçant l'oxydation des acides gras et en augmentant la production de cétones. Ce Kit Human GC Immunoassay est un test ELISA sandwich en phase solide en trois étapes pour mesurer la GC humaine dans les surnageants de culture cellulaire, le sérum et le plasma. Le kit contient E. coli exprimant la GC humaine recombinante et les anticorps produits contre les protéines recombinantes. Les résultats obtenus avec le GC humain naturel présentent une courbe linéaire parallèle à la courbe standard obtenue avec les étalons Recombinants. Ces résultats montrent que ce kit peut être utilisé pour déterminer les valeurs relatives de masse du GC humain naturel.

Principe de détection

Le kit adopte la méthode sandwich à double anticorpsTechnique ELISA: le pack d'anticorps de capture est placé sur une plaque enzymatique, le GC à tester est capturé dans l'échantillon et les étalons, après le nettoyage à l'incubation, puis l'anticorps de détection marqué est ajouté pour le nettoyage post - incubation, formant un complexe immunologique "anticorps de capture - antigène - anticorps de détection", puis la peroxydase de raifort couplée à la streptavidine est ajoutée pour l'incubation, après le nettoyage à la fin de l'incubation, puis le liquide de rendu des couleurs TMB est ajouté après que le liquide de terminaison soit ajouté pour arrêter la réaction si le bleu est visible dans l'échantillon à tester. Les Constituents libres au cours de la détection ont tous été lavés, la valeur de do a été mesurée à 450 nm à l'aide d'un étalon enzymatique, la profondeur de la couleur et le contenu de la substance à mesurer dans l'échantillon étaient proportionnels, la concentration de GC dans l'échantillon a été calculée en traçant une courbe standard.

Points opérationnels

1. Lorsque vous mélangez des solutions de protéines, vous devez toujours éviter les cloques. Pour éviter la contamination croisée, la tête du pistolet de pipette doit être remplacée lorsque chaque étalon, échantillon et réactif est ajouté. De plus, chaque réactif doit être utilisé séparément avec le récipient.

2. Assurez - vous que le réactif est ajouté au trou de la plaque sans interruption. Pour assurer des résultats précis, un film de plaque bien scellé doit être collé pendant l'étape d'incubation.

3.lorsque vous utilisez un lave - plaque automatique, ajoutez une période d'immersion de 30 secondes après avoir ajouté le tampon de lavage, ou tournez la plaque de 180 degrés entre les étapes de lavage, ce qui peut améliorer la précision de la détermination.

4. L'agent de rendu des couleurs doit rester incolore jusqu'à ce qu'il soit ajouté à la plaque. Assurez - vous que l'agent de rendu des couleurs n'est pas exposé à la lumière. L'agent de rendu des couleurs doit changer d'incolore en bleu.

5. Le liquide de terminaison doit être ajouté à la plaque dans le même ordre que l'agent de rendu des couleurs. Après avoir ajouté le liquide de terminaison, la couleur formée dans les trous passera du bleu au jaune. Les pores verts indiquent que le liquide de terminaison n'est pas bien mélangé avec la solution de matrice.

Autres matériaux nécessaires

1. L'étalon enzymatique, y compris la longueur d'onde de dosage de 450 nm, tout en comprenant la longueur d'onde de correction de 600 - 680 nm est meilleure;

2. Pipettes et têtes de pistolet;

3. Eau distillée ou désionisée;

4. Cylindre gradué de 100 - 1000 ml;

5. Bouteille de lavage, pistolet d'échappement ou machine automatique de nettoyage de microplaques;

6. Oscillateur à microplaques à piste horizontale, capable de maintenir une vitesse de 500 ± 50 tr / min;

7. Tubes à essai pour la dilution des normes et des échantillons.

spécification48T Glucagon (GC) Kit humain
Précautions

1. Le liquide de terminaison fourni par ce kit est une solution diluée d'acide sulfurique qui a une certaine corrosivité et doit être manipulé avec prudence.

2. Certains ingrédients de ce kit contiennent des conservateurs qui peuvent provoquer des réactions allergiques cutanées, le masque doit être porté pour éviter l'inhalation de la brume.

3. L'agent de rendu des couleurs B peut provoquer une irritation de la peau, des yeux et des voies respiratoires et doit être muni d'un masque pour éviter d'inhaler la brume.

4. Portez des gants de protection, des protecteurs des yeux et du visage et lavez - vous les mains après le traitement.

Préparation des réactifs

1. Placez tous les réactifs à l'équilibre à température ambiante pendant environ 30 minutes avant utilisation.

Configuration du liquide de lavage / diluant: si le liquide de lavage / diluant (20 ×) a un dégagement de cristaux, il doit être chauffé à 37 ° c ⾄ les cristaux sont tous dissous. Diluer avec de l'eau distillée 1: 20 (exemple: 1 ml de liquide de lavage concentré dans 19 ml d'eau distillée)

Configuration standard

Retirer les standards dans le kit, préparer7 tubes, d'abord à partir de40 ng / mlStandard (200 µl) on prélève à la demande une quantité diluée à 2000 pg / ML avec une dilution 1x (example: 50 µl de solution mère étalon + 950 µl de dilution 1x pour obtenir 1000 µl d'étalon de concentration 2000pg / ML), puis on ajoute 500 µl de dilution 1x dans chacun des 6 Tubes à essai, dans lesquels on dilue successivement 2000 pg / ml d'étalon 2x à 6 gradients, pour un total de 7 concentrations d'étalon, successivement:2000pg/mL, 1000pg/mL, 500pg/mL, 250pg/mL, 125pg/mL, 62,5pg/mL, 31,25pg/mL,Aspirer à partir d'une solution de norme de concentration500 μl de l'étalon dans le tube à essai suivant, mélanger doucement par soufflage et ainsi de suite pour effectuer une dilution multipliée par deux de l'étalon (comme indiqué sur la figure), 1 x dilution utilisée comme étalon à concentration nulle (0 pg / ML)

Calcul des résultats

Calcul de la moyenne des pores standard et échantillonValeur od et soustraire la valeur od du trou vide comme valeur de correction. Avec la concentration en abscisse et la valeur od en ordonnée, une courbe standard de la fonction logique à quatre paramètres est tracée sur du papier de coordonnées (les valeurs des groupes vides sont supprimées lors de la composition du diagramme) ou une courbe standard est créée à l'aide d'un logiciel informatique capable de générer un ajustement de courbe logique à quatre paramètres (4 - p). Si la valeur od de l'échantillon est supérieure à la limite supérieure de la courbe standard, elle doit être réévaluée après dilution appropriée et multipliée par le multiple de dilution correspondant lors du calcul de la concentration de l'échantillon.- Oui.

Exemples de données

Les données et les courbes suivantes sont fournies à titre indicatif seulement, et les expérimentateurs doivent établir une courbe standard basée sur leurs propres données expérimentales.

La courbe standard illustrée sur cette figure est à titre d'exemple seulement, le calcul des résultats doit être basé sur la courbe standard tracée pour la même norme d'essai pour calculer le résultat de l'échantillon.
sensibilité

Testé sur échantillon, la sensibilité de détection de ce kit est15,63 pg/mL.

Spécificité

Ce kit de détermination identifie les personnes naturelles et reconstituéesGC- Oui.

D'autres protéines pertinentes sont préparées en tampon de dilution comme50ng/mL， Et déterminer la réactivité croisée. Aucune réaction croisée significative n'a été observée.

Résumé des étapes expérimentales
Ajouter les normes et les échantillons, 37 ℃ réaction à l'abri de la lumière 1,5 H, laver 3 fois.

2. Ajout d'anticorps de détection,37°c réaction à l'abri de la lumière pendant 1H, lavage 4 fois.

3. Addition de conjugués enzymatiques,37°c réaction à l'abri de la lumière pendant 30 minutes, lavage 4 fois.

4. Ajouter le liquide de rendu des couleurs, 37 ℃ réaction à l'abri de la lumière pendant 15 minutes.

5. Ajoutez le liquide de terminaison, lisez dans les 5 minutes

personneGlucagon(GC)Kit pour la détection quantitative du surnageant de culture cellulaire, sérum, plasma humainGC, cette notice doit être lue dans son intégralité avant d'utiliser ce produit, personnesLe kit ELISA est destiné à la recherche scientifique et ne peut pas être utilisé pour d'autres diagnostics- Oui.