Service Support Caspase 3 (casp3) Kit humain

Soutien du Service Trousse de Caspase 3 (casp3) humaine
Introduction
La caspase - 3 est une protéine de la Caspase qui interagit avec la caspase - 8 et la caspase - 9. Il est codé par le gène casp3. Les homologues de casp3 ont été découverts chez de nombreux mammifères pour lesquels des données génomiques complètes sont disponibles. La protéine casp3 est un membre de la famille des aspartates protéases (Caspases). L'activation séquentielle des Caspases joue un rôle central dans la phase d'exécution de l'apoptose. Il se présente sous la forme d'une proenzyme inactive qui subit un traitement protéolytique avec des résidus d'acide aspartique conservés pour produire deux sous - unités, grandes et petites, dimérisées pour former une enzyme active. Cette protéine Clive et active les Caspases 6 et 7; Alors que la protéine elle - même est traitée et activée par Caspases 8, 9 et 10. C'est la Caspase la plus importante impliquée dans le clivage de la protéine précurseur bêta - 4a amyloïde. Ce Kit Human casp3 Immunoassay est un test ELISA sandwich en phase solide en trois étapes pour la mesure de casp3 humain dans les surnageants, le sérum et le plasma de culture cellulaire. Le kit contient E. coli exprimant casp3 humain Recombinant et des anticorps produits contre la protéine recombinante. Les résultats obtenus avec casp3 humain naturel présentent une courbe linéaire parallèle à la courbe standard obtenue avec les étalons Recombinants. Ces résultats montrent que ce kit peut être utilisé pour déterminer la valeur relative de la masse de casp3 humaine naturelle.

Principe de détection

Le kit adopte la méthode sandwich à double anticorpsTechnique ELISA: les paquets d'anticorps de capture sont placés sur une plaque enzymatique, les échantillons et les étalons sont capturés pour le casp3 à tester, après le nettoyage d'incubation, puis les anticorps de détection marqués sont ajoutés pour le nettoyage post - incubation, formant le complexe immunologique "anticorps de capture - antigène - anticorps de détection", puis la peroxydase de raifort couplée à la streptavidine est ajoutée pour l'incubation, après le nettoyage à la fin de l'incubation, puis le liquide de rendu des couleurs TMB est ajouté après que le liquide de terminaison soit ajouté pour arrêter la réaction si le bleu est visible dans l'échantillon à tester. Les Constituents libres au cours de la détection ont tous été lavés, la valeur de do a été mesurée à 450 nm à l'aide d'un étalon enzymatique, la profondeur de la couleur et le contenu de la substance à mesurer dans l'échantillon étaient proportionnels, et la concentration de casp3 dans l'échantillon a été calculée en traçant une courbe standard.

Points opérationnels

1. Lorsque vous mélangez des solutions de protéines, vous devez toujours éviter les cloques. Pour éviter la contamination croisée, la tête du pistolet de pipette doit être remplacée lorsque chaque étalon, échantillon et réactif est ajouté. De plus, chaque réactif doit être utilisé séparément avec le récipient.

2. Assurez - vous que le réactif est ajouté au trou de la plaque sans interruption. Pour assurer des résultats précis, un film de plaque bien scellé doit être collé pendant l'étape d'incubation.

3.lorsque vous utilisez un lave - plaque automatique, ajoutez une période d'immersion de 30 secondes après avoir ajouté le tampon de lavage, ou tournez la plaque de 180 degrés entre les étapes de lavage, ce qui peut améliorer la précision de la détermination.

4. L'agent de rendu des couleurs doit rester incolore jusqu'à ce qu'il soit ajouté à la plaque. Assurez - vous que l'agent de rendu des couleurs n'est pas exposé à la lumière. L'agent de rendu des couleurs doit changer d'incolore en bleu.

5. Le liquide de terminaison doit être ajouté à la plaque dans le même ordre que l'agent de rendu des couleurs. Après avoir ajouté le liquide de terminaison, la couleur formée dans les trous passera du bleu au jaune. Les pores verts indiquent que le liquide de terminaison n'est pas bien mélangé avec la solution de matrice.

Autres matériaux nécessaires

1. L'étalon enzymatique, y compris la longueur d'onde de dosage de 450 nm, tout en comprenant la longueur d'onde de correction de 600 - 680 nm est meilleure;

2. Pipettes et têtes de pistolet;

3. Eau distillée ou désionisée;

4. Cylindre gradué de 100 - 1000 ml;

5. Bouteille de lavage, pistolet d'échappement ou machine automatique de nettoyage de microplaques;

6. Oscillateur à microplaques à piste horizontale, capable de maintenir une vitesse de 500 ± 50 tr / min;

7. Tubes à essai pour la dilution des normes et des échantillons.

Soutien du Service Caspase3 (casp3) Kit humain
Précautions

1. Le liquide de terminaison fourni par ce kit est une solution diluée d'acide sulfurique qui a une certaine corrosivité et doit être manipulé avec prudence.

2. Certains ingrédients de ce kit contiennent des conservateurs qui peuvent provoquer des réactions allergiques cutanées, le masque doit être porté pour éviter l'inhalation de la brume.

3. L'agent de rendu des couleurs B peut provoquer une irritation de la peau, des yeux et des voies respiratoires et doit être muni d'un masque pour éviter d'inhaler la brume.

4. Portez des gants de protection, des protecteurs des yeux et du visage et lavez - vous les mains après le traitement.

Préparation des réactifs

1. Placez tous les réactifs à l'équilibre à température ambiante pendant environ 30 minutes avant utilisation.

Configuration du liquide de lavage / diluant: si le liquide de lavage / diluant (20 ×) a un dégagement de cristaux, il doit être chauffé à 37 ° c ⾄ les cristaux sont tous dissous. Diluer avec de l'eau distillée 1: 20 (exemple: 1 ml de liquide de lavage concentré dans 19 ml d'eau distillée)

Configuration standard

Retirer les standards dans le kit, préparer7 tubes, d'abord à partir de200 ng / mlStandard (200 µl) on prélève à la demande une quantité diluée à 10 ng / ML avec une dilution 1x (example: 50 µl de solution mère étalon + 950 µl de dilution 1x pour obtenir 1000 µl d'étalon de concentration 10ng / ML), puis on ajoute 500 µl de dilution 1x dans chacun des 6 tubes, on dilue successivement 2 fois plus d'étalon 10ng / ML dans ces 6 tubes individuels à 6 gradients, pour un total de 7 concentrations d'étalon, successivement:10% / ML, 5% / ML, 2,5% / ML, 1,25 ng / ML, 0625 ng / ML, 0313 ng / ML,Aspiré à partir de la solution standard la plus concentrée500 μl de l'étalon dans le tube à essai suivant, mélanger doucement par soufflage et ainsi de suite pour effectuer une dilution multipliée par deux de l'étalon (comme indiqué sur la figure), 1 x dilution utilisée comme étalon à concentration nulle (0 ng / ML)

Calcul des résultats

Calcul de la moyenne des pores standard et échantillonValeur od et soustraire la valeur od du trou vide comme valeur de correction. Avec la concentration en abscisse et la valeur od en ordonnée, une courbe standard de la fonction logique à quatre paramètres est tracée sur du papier de coordonnées (les valeurs des groupes vides sont supprimées lors de la composition du diagramme) ou une courbe standard est créée à l'aide d'un logiciel informatique capable de générer un ajustement de courbe logique à quatre paramètres (4 - p). Si la valeur od de l'échantillon est supérieure à la limite supérieure de la courbe standard, elle doit être réévaluée après dilution appropriée et multipliée par le multiple de dilution correspondant lors du calcul de la concentration de l'échantillon.- Oui.

Exemples de données

Les données et les courbes suivantes sont fournies à titre indicatif seulement, et les expérimentateurs doivent établir une courbe standard basée sur leurs propres données expérimentales.

La courbe standard illustrée sur cette figure est à titre d'exemple seulement, le calcul des résultats doit être basé sur la courbe standard tracée pour la même norme d'essai pour calculer le résultat de l'échantillon.
sensibilité

Testé sur échantillon, la sensibilité de détection de ce kit est0,08 ng/ml.

Spécificité

Ce kit de détermination identifie les personnes naturelles et reconstituéesCASP3- Oui.

D'autres protéines pertinentes sont préparées en tampon de dilution comme50ng/mL， Et déterminer la réactivité croisée. Aucune réaction croisée significative n'a été observée.

Résumé des étapes expérimentales
Ajouter les normes et les échantillons, 37 ℃ réaction à l'abri de la lumière 1,5 H, laver 3 fois.

2. Ajout d'anticorps de détection,37°c réaction à l'abri de la lumière pendant 1H, lavage 4 fois.

3. Addition de conjugués enzymatiques,37°c réaction à l'abri de la lumière pendant 30 minutes, lavage 4 fois.

4. Ajouter le liquide de rendu des couleurs, 37 ℃ réaction à l'abri de la lumière pendant 15 minutes.

5. Ajoutez le liquide de terminaison, lisez dans les 5 minutes

personneCaspase3(CASP3)Kit pour la détection quantitative du surnageant de culture cellulaire, sérum, plasma humainCASP3, cette notice doit être lue dans son intégralité avant d'utiliser ce produit, personnesLe kit ELISA est destiné à la recherche scientifique et ne peut pas être utilisé pour d'autres diagnostics- Oui.