Lymphocytes spléniques de poisson

Lymphocytes spléniques de poisson

|Propriétés de la marchandise:

|Introduction aux cellules:

Lymphe splénique de poisson isolée du tissu splénique; La rate est le grand organe immunitaire de l'organisme, qui représente le tissu lymphatique total du corps25%Contient un grand nombre de lymphocytes et de macrophages, est le Centre de l'immunité cellulaire et humorale du corps. Situé au fond de la nervure latérale arrière de la zone de la nervure de saison gauche, avec9–11Nervures opposées, grand axe avec le10Les côtes sont cohérentes. Le diaphragme est adjacent au diaphragme et au sinus costal - diaphragmatique gauche, avec l'estomac à l'avant, le rein gauche à l'arrière, la Glande surrénale gauche, l'extrémité inférieure du canal splénique du côlon, les organes cellulaires réticulo - endothéliaux mous. Lymphocytes (lymphocytes), un type de globules blancs, produit par les organes lymphatiques, un composant cellulaire important de la fonction de réponse immunitaire de l'organisme. Les organes lymphatiques peuvent être divisés en deux catégories, les organes lymphatiques centraux (aka organes lymphatiques primaires) et les organes lymphatiques environnants (aka organes lymphatiques secondaires), en fonction des différences dans leur occurrence et leur fonction. Les premiers comprennent le thymus, le sac supracoluminal ou leurs organes équivalents (certains pensent que chez les mammifères, c'est la moelle osseuse). Sans stimulation antigénique, ils prolifèrent constamment les lymphocytes et les transfèrent à maturité vers les organes lymphatiques environnants. Ce dernier comprend la rate, les ganglions lymphatiques, etc. Les lymphocytes matures doivent se différencier et se multiplier en fonction de la stimulation antigénique, puis remplir leur fonction immunitaire.

|Introduction à la méthode:

Lymphe splénique de poisson isolé en laboratoire préparé en utilisant la méthode de broyage mécanique combinée avec la méthode de centrifugation à gradient de densité, la quantité totale de cellules est d'environ5×10⁵cellules/La bouteille.

|Détection de qualité:

Lymphe splénique de poisson isolée en laboratoire testée et ne contenant pas deVIH-1Et,HBVEt,VHC, mycoplasmes, bactéries, levures et champignons, etc.

|Information sur la culture:

Milieu de culture: contientFBSEt,pénicillineEt,StreptomycineAttendre

Fréquence de changement de liquide: chaque2 - 3Changement de liquide une fois par jour

Caractéristiques de croissance: suspension

Forme cellulaire: ronde

Propriétés de passage: pas de prolifération; Pas de génération

Sucs digestifs:0,25%

Conditions de culture: phase gazeuse: air,95%;CO2，5%

Cycle de culture in vitro limité de lymphe splénique de poisson; Il est recommandé d'utiliser un milieu de croissance adapté et le bon mode opératoire pour la culture afin de garantir un excellent état de culture de cette cellule.

| opérations de culture cellulaire:

1) réanimer les cellules:Le lyophilisateur contenant la suspension cellulaire est décongelé en agitant rapidement dans un bain - Marie à 37°c, en ajoutant 4 ml de milieu de culture pour bien mélanger. Centrifuger 4 min à 1000 RPM, éliminer le surnageant et bien souffler après addition de 1 - 2 ml de milieu. Toutes les suspensions cellulaires sont ensuite ajoutées au flacon de culture pour une nuit de culture (ou la suspension cellulaire est ajoutée à une boîte de 10 cm, environ 8 ml de milieu sont ajoutés pour une nuit de culture). Changez de liquide le lendemain et vérifiez la densité cellulaire.

2) Passage cellulaire:Si la densité cellulaire atteint 80% - 90%, la culture de passage peut être effectuée.

1. Jeter le surnageant de culture et laver les cellules 1 - 2 fois avec du PBS sans ions calcium et magnésium.

Ajouter 1 ml de digestat (0,25% Trypsin - 0,53 mm EDTA) dans un flacon de culture, placer dans un incubateur à 37 ° C pour la digestion pendant 1 - 2 minutes, puis observer la digestion des cellules sous un microscope, si la plupart des cellules deviennent rondes et tombent, rapidement revenir à la table d'opération, tapoter quelques flacons de culture après avoir ajouté une petite quantité de milieu pour terminer la digestion.

3. Appuyez sur 6 - 8 ml / flacon pour compléter le milieu de culture, bien agiter et bien aspirer, centrifuger à 1000 RPM pendant 4 minutes, retirer le surnageant, ajouter 1 - 2 ml de milieu de culture et bien souffler.

4. Distribuer la suspension cellulaire dans une nouvelle boîte contenant 8 ml de milieu ou dans un flacon dans un rapport de 1: 2.

3) lyophilisation des cellules:La lyophilisation cellulaire peut être effectuée lorsque la croissance cellulaire est en bon état. La bouteille t25 ci - dessous est de catégorie;

Lorsque les cellules sont congelées, après avoir abandonné le milieu de culture, le PBS est lavé une fois et ajouté 1 ml, après que les cellules deviennent rondes et tombent, ajouter 1 ml de milieu de culture contenant du sérum pour terminer la digestion, peut être compté à l'aide d'une plaque de comptage de globules.

2. 4 min 1000rpm centrifuger pour enlever le dessus. Ajouter 1 ml de sérum pour remettre en suspension les cellules, ajouter le sérum et le DMSO en fonction du nombre de cellules, mélanger doucement, la concentration finale de DMSO est de 10%, la densité cellulaire n'est pas inférieure à 1x106 / ML, chaque lyophilisateur conserve 1 ml de suspension cellulaire, faites attention au lyophilisateur pour bien identifier.

3. Placez le réservoir de congélation dans la boîte de refroidissement du programme, mettez - le dans le réfrigérateur à - 80 degrés, 2 heures plus tard dans le stockage d'irrigation à l'azote liquide. Enregistrez la position de la lyophilisation pour la récupérer la prochaine fois.

| Notes:

1. Après avoir reçu des cellules nucléaires non érythroïdes, observez d'abord si la bouteille de cellules est en bon état, si le liquide de culture a des fuites, des troubles et d'autres phénomènes, si ces phénomènes se produisent, veuillez nous contacter à temps.

2. Lisez attentivement les instructions cellulaires pour connaître les informations relatives aux cellules, telles que la morphologie cellulaire, le milieu de culture utilisé, la proportion de sérum, les Cytokines requises, etc., pour assurer les conditions de culture cellulaire *. En cas de problèmes cellulaires dus à des conditions de culture non *, la responsabilité est à la charge du client.

3. Essuyez la surface du flacon cellulaire avec de l'alcool à 75% et observez l'état des cellules au microscope. En raison de problèmes de transport, les cellules collées auront une petite quantité de tomber de la paroi du flacon, placez les cellules dans un incubateur et laissez - les incuber pendant 4 à 6 heures, puis retirez - les pour observation. À ce stade, la plupart des cellules seront collées, si les cellules ne peuvent toujours pas être collées, veuillez déterminer la viabilité cellulaire par coloration au bleu Trypan, si la viabilité cellulaire est confirmée, veuillez centrifuger les cellules après une nouvelle culture murale avec du milieu frais; Si le résultat de la coloration montre que les cellules ne sont pas viables, veuillez prendre une photo et nous contacter à temps, après confirmation des informations, nous vous enverrons un autre envoi gratuit.

Après avoir laissé reposer les cellules sur la paroi, s'il vous plaît verser le milieu à l'intérieur de la bouteille de cellules, laissez 6 ~ 8 ML pour maintenir la culture normale des cellules, à environ 80% de la confluence des cellules ATCC CRL - 1711 (sf9) pour le passage normal.

5. Demandez au client d'utiliser le milieu de culture dans les mêmes conditions pour la culture cellulaire. L'excès de milieu de culture dans le flacon de culture peut être collecté en réserve, les cellules peuvent être mélangées avec un certain pourcentage et le milieu de culture autonome du client lors du passage, de sorte que les cellules s'adaptent progressivement aux conditions de culture.

6. Il est recommandé aux clients de prendre plusieurs photos de cellules chacun pendant les 3 premiers jours après la réception des cellules, d'enregistrer l'état des cellules, de faciliter la communication avec le Département technique. En raison du transport, des conditions instables peuvent survenir dans les cellules sensibles individuelles, veuillez nous contacter à temps pour nous informer des spécificités des cellules afin que nos techniciens puissent suivre les visites de retour jusqu'à ce que le problème soit résolu.

7. La cellule est pour l'usage scientifique seulement.

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