Cellules souches mésenchymateuses du cordon ombilical canin

Cellules souches mésenchymateuses du cordon ombilical canin

|Propriétés de la marchandise:

|Introduction aux cellules:

Séparation sèche mésenchymateuse du cordon ombilical du chien; Le cordon ombilical est une structure tubulaire de la classe de lactation reliant le fœtus au placenta. Il s'est avéré être formé par l'enveloppe amniotique enroulant le sac vitellin et l'extension en forme de tige de l'urètre. Les vaisseaux sanguins du cordon ombilical qui traversent l'urètre sont les artères ombilicales et les veines ombilicales, et les vaisseaux sanguins du sac vitellin sont les artères mésentériques ombilicales et les veines mésentériques ombilicales. Lorsque le sac vitellin et ses vaisseaux sanguins se dégradent, les artères ombilicales et les veines ombilicales se développent et la mésenchymose de la gélule lâche est visible dans ces espaces. Dans l'utérus, les capillaires qui sortent de l'artère utérine dans la partie maternelle du placenta, à proximité des capillaires foetaux de la partie fille du placenta, sont effectués ici entre le sang maternel et foetal.CO2etO2Les métabolites, c'est - à - dire l'échange de déchets métaboliques et de nutriments. L'artère ombilicale transporte les déchets du fœtus au placenta, et la veine ombilicale transporteO2Et les nutriments sont transportés du placenta au fœtus. Les déchets métaboliques du fœtus sont ensuite transportés par les veines utérines et certaines hormones et anticorps, etc., sont également transférés de la mère au fœtus via le cordon ombilical. Le cordon ombilical contient un grand nombre de cellules souches, qui sont les graines de la vie, qui se différencient en différentes cellules de l'organisme, produisant toutes sortes de fruits différents - cellules sanguines, cellules nerveuses, cellules osseuses, etc. Les cellules souches sont des populations cellulaires à potentiel d'auto - renouvellement, hautement prolifératif et de différenciation multiple; Ces cellules peuvent maintenir les caractéristiques et le nombre de leurs propres cellules en se divisant et peuvent à leur tour se différencier en diverses cellules tissulaires, jouant ainsi un rôle actif dans la réparation des tissus, etc. Cellules souches mésenchymateuses (MSC), est une cellule souche à fort potentiel d'auto - renouvellement et de différenciation multidirectionnelle. Peut se différencier en plusieurs cellules tissulaires autres que les cellules hématopoïétiques dans différentes conditions d'induction et a un rôle de soutien hématopoïétique, d'immunomodulation, de réparation tissulaire, etc.; Actuellement, il est plus utilisé dans le traitement des maladies immunitaires rhumatismales. Cellules souches mésenchymateuses (MSC), une cellule souche adulte à potentiel d'auto - renouvellement et de différenciation multidirectionnelle, présente dans la moelle osseuse, le tissu adipeux, le sang ombilical et de nombreux tissus fœtaux. Il peut sécréter une variété de Cytokines et de facteurs de croissance qui favorisent les cellules souches hématopoïétiques (HSC), la prolifération et la différenciation.MSCEgalement immunomodulateur, anti - inflammatoire et réparateur tissulaire, il atténue la maladie du greffon contre l'hôte (GVHD), et autres complications liées à la transplantation.

|Introduction à la méthode:

La tige mésenchymateuse de cordon ombilical canin isolée en laboratoire est préparée par la méthode de collage tissulaire, la quantité totale de cellules est d'environ5×10⁵cellules/La bouteille.

|Détection de qualité:

Mésenchymateuse de cordon ombilical canin isolée en laboratoireCD90Identification par immunofluorescence, pureté possible90%Ci - dessus et ne contient pasVIH-1Et,HBVEt,VHC, mycoplasmes, bactéries, levures et champignons, etc.

|Information sur la culture:

Milieu de culture: contientFBSEt,FEGEt,bFGFEt,pénicillineEt,StreptomycineAttendre

Fréquence de changement de liquide: chaque2 - 3Changement de liquide une fois par jour

Caractéristiques de croissance: Wall

Forme cellulaire: comme fibroblaste

Caractéristiques de la génération: transmissible3 - 5Génération autour

Sucs digestifs:0,25%

Conditions de culture: phase gazeuse: air,95%;CO2，5%

Cycle de culture in vitro limité de tiges mésenchymateuses de cordon ombilical canin; Il est recommandé d'utiliser un milieu de croissance adapté et le bon mode opératoire pour la culture afin de garantir un excellent état de culture de cette cellule.

| opérations de culture cellulaire:

1) réanimer les cellules:Le lyophilisateur contenant la suspension cellulaire est décongelé en agitant rapidement dans un bain - Marie à 37°c, en ajoutant 4 ml de milieu de culture pour bien mélanger. Centrifuger 4 min à 1000 RPM, éliminer le surnageant et bien souffler après addition de 1 - 2 ml de milieu. Toutes les suspensions cellulaires sont ensuite ajoutées au flacon de culture pour une nuit de culture (ou la suspension cellulaire est ajoutée à une boîte de 10 cm, environ 8 ml de milieu sont ajoutés pour une nuit de culture). Changez de liquide le lendemain et vérifiez la densité cellulaire.

2) Passage cellulaire:Si la densité cellulaire atteint 80% - 90%, la culture de passage peut être effectuée.

1. Jeter le surnageant de culture et laver les cellules 1 - 2 fois avec du PBS sans ions calcium et magnésium.

Ajouter 1 ml de digestat (0,25% Trypsin - 0,53 mm EDTA) dans un flacon de culture, placer dans un incubateur à 37 ° C pour la digestion pendant 1 - 2 minutes, puis observer la digestion des cellules sous un microscope, si la plupart des cellules deviennent rondes et tombent, rapidement revenir à la table d'opération, tapoter quelques flacons de culture après avoir ajouté une petite quantité de milieu pour terminer la digestion.

3. Appuyez sur 6 - 8 ml / flacon pour compléter le milieu de culture, bien agiter et bien aspirer, centrifuger à 1000 RPM pendant 4 minutes, retirer le surnageant, ajouter 1 - 2 ml de milieu de culture et bien souffler.

4. Distribuer la suspension cellulaire dans une nouvelle boîte contenant 8 ml de milieu ou dans un flacon dans un rapport de 1: 2.

3) lyophilisation des cellules:La lyophilisation cellulaire peut être effectuée lorsque la croissance cellulaire est en bon état. La bouteille t25 ci - dessous est de catégorie;

Lorsque les cellules sont congelées, après avoir abandonné le milieu de culture, le PBS est lavé une fois et ajouté 1 ml, après que les cellules deviennent rondes et tombent, ajouter 1 ml de milieu de culture contenant du sérum pour terminer la digestion, peut être compté à l'aide d'une plaque de comptage de globules.

2. 4 min 1000rpm centrifuger pour enlever le dessus. Ajouter 1 ml de sérum pour remettre en suspension les cellules, ajouter le sérum et le DMSO en fonction du nombre de cellules, mélanger doucement, la concentration finale de DMSO est de 10%, la densité cellulaire n'est pas inférieure à 1x106 / ML, chaque lyophilisateur conserve 1 ml de suspension cellulaire, faites attention au lyophilisateur pour bien identifier.

3. Placez le réservoir de congélation dans la boîte de refroidissement du programme, mettez - le dans le réfrigérateur à - 80 degrés, 2 heures plus tard dans le stockage d'irrigation à l'azote liquide. Enregistrez la position de la lyophilisation pour la récupérer la prochaine fois.
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Adénylate cyclase humorale(AdenylateCyclase)Kit de quantification de fluorescence active20Une fois

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Boîte de test de contenu Spectrophotométrie visible 50gérer/ 48L'échantillon

Cassette de test de déshydrogénase Spectrophotométrie UV 50gérer/ 48L'échantillon

Boîte de test de teneur en sucre réduit Spectrophotométrie visible 50gérer/ 24L'échantillon

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lapinImmunoglobulinG, IgGELISAKitImmunoglobulines de lapinG(IgG)Kits de réactifs96T / 48TSous - assemblage importé

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ADNPolymérase μ/ ADN polμ anticorps

IGFBP3Personnes reconstituéesIGFBP3 / IBP3Les protéinesprotéines

Protéines de liaison4(RBP4)Protéines recombinantesProtéine de liaison au rétinol recombinante 4, plasma (RBP4)

CD48Personnes reconstituéesCD48 / SLAMF2 / BCM1Les protéines(Fc)étiquette) Protéines

IL17RA protéine humainePersonnes reconstituéesIL17RA / CD217Les protéines

Protéine HA H12N5Grippe A recombinanteH12N5 (A/teal à ailes vertes/ALB/199/1991)Hémagglutinine(hémagglutinine / HA)Les protéines

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IL17RA protéine humainePersonnes reconstituéesIL17RA / CD217Les protéines

IGFBP3Personnes reconstituéesIGFBP3 / IBP3Les protéinesprotéines

Protéine HA H12N5Grippe A recombinanteH12N5 (A/teal à ailes vertes/ALB/199/1991)Hémagglutinine(hémagglutinine / HA)Les protéines

CD48Personnes reconstituéesCD48 / SLAMF2 / BCM1Les protéines(Fc)étiquette) Protéines

| Notes:

1. Après avoir reçu des cellules nucléaires non érythroïdes, observez d'abord si la bouteille de cellules est en bon état, si le liquide de culture a des fuites, des troubles et d'autres phénomènes, si ces phénomènes se produisent, veuillez nous contacter à temps.

2. Lisez attentivement les instructions cellulaires pour connaître les informations relatives aux cellules, telles que la morphologie cellulaire, le milieu de culture utilisé, la proportion de sérum, les Cytokines requises, etc., pour assurer les conditions de culture cellulaire *. En cas de problème avec les cellules dû à des conditions de culture non *, la responsabilité incombe au client.

3. Essuyez la surface du flacon cellulaire avec de l'alcool à 75% et observez l'état des cellules au microscope. En raison de problèmes de transport, les cellules collées auront une petite quantité de tomber de la paroi du flacon, placez les cellules dans un incubateur et laissez - les incuber pendant 4 à 6 heures, puis retirez - les pour observation. À ce stade, la plupart des cellules seront collées, si les cellules ne peuvent toujours pas être collées, veuillez déterminer la viabilité cellulaire par coloration au bleu Trypan, si la viabilité cellulaire est confirmée, veuillez centrifuger les cellules après une nouvelle culture murale avec du milieu frais; Si le résultat de la coloration montre que les cellules ne sont pas viables, veuillez prendre une photo et nous contacter à temps, après confirmation des informations, nous vous enverrons un autre envoi gratuit.

Après avoir laissé reposer les cellules sur la paroi, s'il vous plaît verser le milieu à l'intérieur de la bouteille de cellules, laissez 6 ~ 8 ML pour maintenir la culture normale des cellules, à environ 80% de la confluence des cellules ATCC CRL - 1711 (sf9) pour le passage normal.

5. Demandez au client d'utiliser le milieu de culture dans les mêmes conditions pour la culture cellulaire. L'excès de milieu de culture dans le flacon de culture peut être collecté en réserve, les cellules peuvent être mélangées avec un certain pourcentage et le milieu de culture autonome du client lors du passage, de sorte que les cellules s'adaptent progressivement aux conditions de culture.

6. Il est recommandé aux clients de prendre plusieurs photos de cellules chacun pendant les 3 premiers jours après la réception des cellules, d'enregistrer l'état des cellules, de faciliter la communication avec le Département technique. En raison du transport, des conditions instables peuvent survenir dans les cellules sensibles individuelles, veuillez nous contacter à temps pour nous informer des spécificités des cellules afin que nos techniciens puissent suivre les visites de retour jusqu'à ce que le problème soit résolu.

7. La cellule est pour l'usage scientifique seulement