Habituellement, nous pouvons utiliserELISALes échantillons testés sont de plusieurs types, tels que le sérum, le plasma, l'urine, le surnageant de culture cellulaire ou l'homogénat de tissu, etc., et les méthodes de traitement des différents types de pré - échantillons testés ne sont pas les mêmes. Le traitement correct des échantillons est garantiELISAÉtapes * pour l'exactitude et la précision de la détection, voici une brève introduction à la façon dont les différents types d'échantillons sont traités.

1、 sérum

Serum is zui couramment utilisé dansELISALa détection d'une classe d'échantillons, le traitement est également plus simple.

Prélèvement d'échantillons de sang avec un tube à essai ou un tube à centrifuger sans pyrogène et sans endotoxines, placer le tube à essai ou le tube à centrifuger à température ambiante2Heures ou4℃ pendant la nuit, de sorte que le sérum est libéré. (placer le tube à essai ou le tube à centrifuger obliquement pour augmenter la section transversale du liquide permet une plus grande libération de sérum.)4℃1000×gCentrifugation20minuteRecueillir soigneusement. Il est recommandé de fractionner le sérum en plusieurs portions,-20℃ ou-80℃ conserver pour éviter la congélation et la dégel répétées.

L'hémolyse doit être évitée lors de la collecte de sang, car les globules rouges, lorsqu'ils sont lysés, libèrent des substances ayant une activité peroxydase, qui sontHRPMarqué pourELISAIl y aura un rendu des couleurs non spécifique dans la détection, ce qui entraîne une inexactitude dans la détection. La contamination bactérienne doit également être évitée, car le corps des bactéries peut contenir desHRPIl en résulte un faux positif pour le test.

2、 plasma sanguin

Prélèvement d'échantillons de sang à l'aide d'un tube de prélèvement ou de centrifugation contenant un anticoagulant, après prélèvement des échantillons30 minutesIntérieur4℃ 1000×gCentrifugation15 minutesPrenez le plasma. Séparer en plusieurs exemplaires,-20℃ ou-80℃ conserver pour éviter la congélation et la dégel répétées. Évitez les spécimens hémolytiques ou hyperlipidiques.

Les anticoagulants couramment utilisés sontEDTA, l'héparine de sodium et le citrate de sodium, etc., doivent également lire attentivement les instructions du kit lors de la détection, vérifiez si le kit contre l'agent Coagulant a des exigences spéciales.

3、 Culture cellulaire supérieure

Prélever la culture cellulaire sur le tube de centrifugation,1000×gCentrifugation20 minutesEnlever les débris cellulaires et les impuretés, les enlever,-20℃ ou-80℃ conserver pour éviter la congélation et la dégel répétées.

4、 Lysat cellulaire

1) et Aspirer le milieu à l'intérieur de la plaque de culture, digérer les cellules avec des enzymes pancréatiques et ajouter la bonne quantité de milieu pour souffler les cellules de la plaque de culture. Les cellules en suspension peuvent être omises.

2) et Collecte de la suspension cellulaire,1000×gCentrifugation10 minutesAbandonner le milieu de culture et utiliser pré - refroidiPBSRinçage3Une fois.

3) et Ajouter la bonne quantité de pré - refroidissementPBSOu lysats cellulaires (inhibiteurs de protéase ajoutés avant utilisation) pour remettre les cellules en suspension. Habituellement6Plaque de puits la quantité de cellules nécessaire pour un puits150 à 250μL de PBSSurplombant.

4) et Mettre l'échantillon dans-20℃ ou-80℃, Laissez l'échantillon congeler, puis laissez la température ambiante pour décongeler l'échantillon, à plusieurs reprises congeler et dégeler, de sorte que les cellules sont suffisamment lysées. L'échantillon peut également être soumis à une fragmentation par ultrasons pour atteindre le but de la lyse.

5) et 4℃10000 × gCentrifugation10 minutes, enlever les débris cellulaires, enlever,-20℃ ou-80℃ conserver pour éviter la congélation et la dégel répétées.

5, homogénat de tissus

1) et Utiliser des échantillons de tissusPBS (0,01)M, PH 7,4) etRincer, laver le sang ou les impuretés qui restent sur la surface des tissus.

2) et Pesez le bloc de tissu, coupez - le après l'enregistrement, le bloc concassé doit être aussi petit que possible pour faciliter l'homogénation plus complète

3) et Ajouter le tissu dans une certaine proportion pré - refroidiPBS(inhibiteur de protéase ajouté avant utilisation provisoire) homogénat, placé sur glace ou dans un bain de glace. (généralement par poids de tissu:PBSVolume= 1: 9Homogénats proportionnels, par exemple1 grammeLes échantillons de tissus correspondent9 mldePBS, le volume spécifique peut être ajusté de manière appropriée en fonction des besoins expérimentaux, la concentration de l'échantillon doit être multipliée par le multiple de dilution correspondant lors du calcul après détection)

4) et Aspirer l'homogénat au tube de centrifugation,4℃5000 × gCentrifugation5 à 10 minutesEffacer,-20℃ ou-80℃ conserver pour éviter la congélation et la dégel répétées.

6、 Autres échantillons biologiques liquides d'urine, de salive, etc.

1000 × gCentrifugation20 minutesIl peut être détecté.

En général, parce queELISASeule la teneur en protéines solubles peut être détectée, il faut donc s'assurer que tous les échantillons sont des liquides clairs et que les précipités ou les suspensions doivent être éliminés par centrifugation.

Afin de garantir l’exactitude de la détection, elle est conservée-20℃ ou-80L'échantillon de ℃ dans1 ~ 6Détection dans un délai de mois;4℃ les échantillons conservés doivent être1Détection en semaine.

De plus, l'échantillon doit être garanti sansNaN₃Parce queNaN₃InhiberaHRPL'activité, ce qui conduit à des résultats faussement négatifs.