Myoglobine de souris (Myo / MB) Kit ELISA processus opérationnel:

(1), chaque trou dans le trou d'échantillon à tester est ajouté à l'échantillon à tester 100 μ1, chaque type d'échantillon est muni de 3 trous parallèles; Avoir deux trous de contrôle négatifs, chaque trou plus non traité

Lysats cellulaires du Groupe 100 µ1; Un autre puits témoin vide est réalisé et 100 µ1 de lysat cellulaire pur sont ajoutés.

(2) l'enzyme est étiquetée à 4 ° C, le paquet est passé la nuit.

(3) plaque de lavage: aspirer le liquide réactionnel à l'intérieur du trou, sur - laver avec le liquide de lavage une fois (après avoir rempli le liquide de lavage avec le trou de la plaque, c'est - à - dire jeter), après quoi remplir la plaque avec le liquide de lavage

Trous, laisser infuser pendant 1 - 2 minutes, en agitant par intermittence. Sécher sur du papier absorbant après avoir vidé le liquide à l'intérieur du trou. Répétez le lavage 3 - 4 fois.

(4) pbs50 μ1 par puits pour les puits témoins négatifs et 50 μ1 par puits pour les puits d'échantillon et les puits vierges dilués 1: 500 dans le fluide de travail exempt d'anticorps AIF humain.

(5) L'étiquette d'enzyme est placée dans la boîte humide de l'incubateur à 37 ℃, incuber pendant 60 min.

(6) plaque de lavage, identique à (4).

(7) Ajouter une dilution de 1: 5000 de HRP - étiqueté chèvre anti - anticorps Free Workflow 100 μ1 par puits.

(8) L'étiquette enzymatique est placée dans la boîte humide de l'incubateur à 37 ℃, incuber pendant 60 min.

(9) plaque de lavage, identique à (4).

(10) chaque puits plus le liquide de rendu des couleurs TMB 100 μ1, mélanger doucement pendant 10 s, mettre 37 ℃ dans l'obscurité de la réaction pendant 15 - 20 min.

(11) L'addition de 100 µ12mo1 / lh2s04 par puits termine la réaction.

(12) Mesurer la valeur d'absorption lumineuse V1 de 450 nm et la valeur d'absorption lumineuse V2 de 630 nm, respectivement, et la valeur finale mesurée de 0d est la différence entre les deux (v1 - v2) pour réduire par le récipient

Perturbation lumineuse causée par des rayures ou des empreintes de doigts, etc.

(13) Traitement des données: les valeurs de S / N sont calculées après avoir obtenu les valeurs de do pour le spécimen (s) et le témoin négatif (n). S / N > 2,1 est le critère de décision positif.