Optimiser les expériences ELISA pour réduire le bruit de fond est essentiel pour garantir la précision des données. Ce qui suit combine l'expérience expérimentale pour fournir des recommandations d'optimisation à partir des liens de base tels que la fermeture, le lavage, la sélection d'anticorps, etc.:

Optimisation des conditions fermées

La fermeture est une étape centrale dans la réduction des liaisons non spécifiques, il convient de noter les points suivants:

Sélection de l'agent bloquant: l'albumine sérique bovine (BSA) à 5% ou le lait écrémé en poudre sont couramment utilisés, où BSA est approprié pour la plupart des cas, en particulier lorsque l'échantillon contient des concentrations élevées de lipides ou de l'hémolyse, BSA doit être utilisé de préférence pour éviter les interférences. Si vous testez des protéines phosphorylées, évitez d'utiliser du lait écrémé en poudre contenant de la caséine.

Temps de fermeture par rapport à la température: généralement, la température ambiante est fermée pendant 30 minutes à 2 heures, ou 4 ° C pendant la nuit pour améliorer l'uniformité. 37 ° C peut accélérer la réaction, mais il faut prendre soin d'éviter l'évaporation.

Formulation de liquide de fermeture: il est nécessaire de l'utiliser immédiatement pour éviter la congélation et la dégel répétés conduisant à l'échec.

Optimisation des étapes de lavage

Un lavage adéquat est la clé pour abaisser le fond:

Sélection du liquide de lavage: un tampon PBS contenant 0,05% de Tween - 20 est recommandé pour éliminer les substances non liées.

Nombre et durée de lavage: il est recommandé de laver 3 à 5 fois pendant 2 à 3 minutes, en veillant à éliminer les réactifs résiduels.

Optimisation des anticorps et des réactifs

Qualité des anticorps: sélection des anti - un et des anti - deux hautement spécifiques et optimisation des multiples de dilution et des temps d'incubation pour éviter les réactions croisées.

Contrôle du développement: Ajustez raisonnablement la concentration et le temps des réactifs de développement pour éviter que le surdéveloppement ne provoque une élévation du fond.

Autres Notes

Charge protéique: Assurez - vous que la protéine chargée est de bonne qualité et évitez que la surcharge ne provoque une liaison non spécifique.

Environnement expérimental: Évitez la lumière directe intense, en particulier pendant les phases de rendu des couleurs et de détection.