Fibroblastes de la vésicule biliaire humaine

I. propriétés fondamentales des cellules

Nom de la cellule:Fibroblastes de la vésicule biliaire humaine

Source tissulaire: tissu de la vésicule biliaire

Origine du genre: humain

Introduction aux cellules: vésicule biliaire,Est une structure de sac capsulaire en forme de poire située derrière le foie sous - costal droit, qui a un effet de concentration et de stockage de la bile. La paroi de la vésicule biliaire est composée de trois couches: la muqueuse, le myomètre et la membrane externe. Parmi eux, la couche de membrane externe est principalement constituée de fibroblastes.

Milieu de culture: système de culture de fibroblastes primaires

Fréquence de changement de liquide: changement de liquide tous les 2 - 3 jours

Caractéristiques de croissance: culture murale

Morphologie cellulaire: Long fusiforme, cellules irrégulières

Propriétés de passage: caractérisation cellulaire détermine le passage

Sucs digestifs:0,25% de leucose pancréatique

Conditions de culture: phase gazeuse: Air, 95%; CO2 ，5%

II. Méthode d'utilisation:

Fibroblastes de la vésicule biliaire humaineEst une cellule de culture murale, la morphologie cellulaire est en forme de long fuseau, cellules irrégulières, dans le processus opérationnel standard du Ministère de la technologie, les caractéristiques cellulaires transmissibles par les cellules déterminent le passage; Il est recommandé d'effectuer les expériences pertinentes dès que vous recevez les cellules.

Une fois que le client a reçu les cellules, veuillez suivre la méthode ci - dessous.

1. Retirez le flacon de culture cellulaire t25, désinfectez le corps du flacon avec de l'alcool à 75%, retirez la membrane de fermeture et placez - la dans un incubateur cellulaire à 37 ° C, 5% de CO2, humidité saturée et laissez reposer pendant 3 à 4 heures pour stabiliser l'état cellulaire.

2. Digestion des cellules plaquées

1) aspirer le milieu dans le flacon de culture cellulaire t25 et laver les cellules une fois avec du PBS;

2) Ajouter 0,25% de digestif 1ml à t25 dans le flacon de culture, tourner légèrement le flacon de culture à digestif après avoir recouvert tout le fond du flacon de culture, aspirer l'excès de digestif, 37 ℃ bain chaud 1 - 3min; Observé au microscope inversé, après que les cellules aient été rétractées et arrondies, 5 ml de milieu de culture supplémentaires ont été ajoutés pour terminer la digestion;

3) Mélanger doucement avec une paille, ensemencer un flacon de culture t25 en proportion de passage, puis compléter avec du milieu frais à 5 ML, placer la culture dans un incubateur cellulaire à 37 ° C, 5% CO 2, humidité saturée;

4) après l'application des cellules, l'observation de la culture; Le milieu frais est ensuite remplacé à la fréquence des échanges.

3. Enlèvement de cellules

1) Recueillir toutes les suspensions cellulaires, 1000 RPM, centrifuger 5 min, retenir le précipité;

2) Ajouter 0,25% digestif 0,5 ML dans le tube de centrifugation, remettre en suspension le précipité, placer à 37 ℃ digestion 3 min (ou 4 ℃ réfrigérateur laisser reposer 5 - 7 min); La digestion est terminée par l'ajout de 5 ml de milieu à l'intérieur du tube de centrifugation;

3) par 1000 RPM, centrifuger pendant 5 min, jeter le surnageant, remettre en suspension le précipité avec 5 ml de milieu, ensemencer dans un nouveau flacon de culture;

4) après l'application des cellules, l'observation de la culture; Le milieu frais (préchauffé à 37°c) est ensuite remplacé à la fréquence des échanges.

5) Les cellules plaquées à l'intérieur du flacon original sont traitées selon une digestion normale.

4. Expérimentation cellulaire

En raison de la spécificité de l'application de la paroi de cellules primaires, les cellules primaires de la paroi sont transférées à d'autres appareils expérimentaux après digestion (tels que des plaques de verre, des plaques de culture, des boîtes de culture confocantes, etc.), il est nécessaire d'emballer les appareils expérimentaux pour améliorer l'application de la paroi cellulaire et éviter que la cytokine n'affecte bien l'expérience; Paquet conditionné souvent choisi collegène de queue de ratⅠ (2 - 5 μg / cm2), polylysine PLL (0,1 mg / ML), gélatine (0,1%), selon l'espèce cellulaire. Les cellules suspendues / semi - suspendues n'ont pas besoin d'être encapsulées.

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Note sur la culture cellulaire:

Produits de la société pour la recherche scientifique uniquementNotes concernant la culture de cellules primaires. La culture de cellules primaires est une technique expérimentale très importante et une bonne maîtrise de ces considérations rendra votre expérience plus fluide.

Tout d'abord, le fonctionnement stérile est la clé. Assurez - vous de garder l'environnement d'exploitation propre et d'éviter la contamination par des bactéries ou des moisissures, sinon l'expérience échouera.

Deuxièmement, il est également important de choisir le milieu et le sérum appropriés. Les besoins en milieu et en sérum varient d'une cellule à l'autre, alors choisissez le milieu et le sérum appropriés en fonction du type de cellule.

En outre, il est un ingrédient dans la culture cellulaire. Pour être fraîchement préparé, il faut également le réapprovisionner régulièrement pendant le stockage.

La culture au repos est également très importante pendant la culture cellulaire. Les cellules ont besoin d'un certain temps pour s'adapter à leur nouvel environnement après la séparation digestive, évitez donc de retirer fréquemment le flacon de culture pendant ce temps.

De plus, le temps de digestion doit être bien contrôlé. Généralement digéré jusqu'à ce que de minuscules particules de tissus soient visibles à l'œil nu, un temps de digestion trop long peut entraîner une aggravation des dommages cellulaires, ce qui affecte la viabilité de la culture cellulaire.

Enfin, pour certains types particuliers de cellules, il peut être nécessaire d'ajouter des facteurs de croissance spéciaux pour favoriser la croissance et la prolifération cellulaire. Mais il est important de noter que le coût de ces facteurs de croissance est généralement plus élevé.

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