Cellules endothéliales artérielles de la vésicule biliaire humaine

Cellules endothéliales artérielles de la vésicule biliaire humaine

Propriétés fondamentales des cellules:

Introduction aux cellules: vésicule biliaire,Est une structure de sac capsulaire en forme de poire située derrière le foie sous - costal droit, qui a un effet de concentration et de stockage de la bile. La paroi de la vésicule biliaire est composée de trois couches: la muqueuse, le myomètre et la membrane externe. Les artères sont constituées d'une membrane interne, d'une membrane médiane et d'une membrane externe, la membrane interne étant principalement constituée de cellules endothéliales.

Milieu de culture: système de culture de cellules endothéliales primaires

Fréquence de changement de liquide: chaque2 - 3 jours pour changer de liquide une fois

Sucs digestifs:0,25% de leucose pancréatique

Conditions de culture: phase gazeuse: Air, 95%; CO2 ，5%

Méthodes de culture cellulaire primaire:

1. Préparation: Prenez toutes sortes de fournitures de culture stérilisées et placez - les sur le comptoir de purification, désinfectez par UV pendant 20 minutes. Lavez - vous les mains et essuyez les mains jusqu'aux coudes avec de l'alcool à 75% avant de commencer à travailler.

2. Disposition: Allumez la lumière d'alcool, installez le chapeau de paille.

3. Traitement des tissus: Placez le bloc de tissu dans un bécher, rincez avec le liquide de Hanks 2 ~ 3 fois, Enlevez la tache de sang; Si vous soupçonnez que les tissus peuvent être contaminés, vous pouvez d'abord placer dans un mélange contenant du cyan pendant 30 à 60 minutes.

4.cut: couper le tissu en morceaux de taille 2 ~ 3 mm avec des ciseaux ophtalmiques pour faciliter la digestion. Ajoutez 30 à 50 fois plus de liquide que la quantité totale de bloc de tissu, puis versez - le ensemble dans un ballon triangulaire, ligaturez l'embouchure de la bouteille ou Bouchez - la avec un bouchon de colle.

5. Digestion: ou avec un bain d'eau à température constante, ou dans un incubateur à 37 ℃ pour la digestion, la digestion doit être agitée toutes les 20 minutes, par exemple avec un agitateur électromagnétique à température constante pour une meilleure digestion. Le temps de digestion dépend de la taille du bloc de tissu et de la dureté du tissu.

6.separation: dans le processus de digestion voir la turbidité du suc digestif, vous pouvez aspirer une petite quantité de suc digestif sous le miroir, comme le tissu a été dispersé dans des masses cellulaires ou des cellules individuelles, terminer immédiatement la digestion, puis passer à travers un tamis en acier inoxydable approprié, filtrer les morceaux de tissu qui n'ont pas été suffisamment digérés. Centrifuger le suc digestif à basse vitesse (500 ~ 1000 tr / min) pendant 5 minutes, aspirer le surnageant et ajouter la bonne quantité de liquide de culture contenant du sérum.

7. Comptage: comptez avec la plaque de comptage, telle que la densité cellulaire de la suspension cellulaire est trop grande, après ajustement de la solution de culture de supplément, divisé dans le flacon de culture. Pour la plupart des cellules, les exigences de pH sont dans la gamme 7,2 ~ 7,4, le liquide de culture est légèrement rouge, comme la couleur jaunâtre, indiquant que le liquide devient acide et peut être ajusté par NaHCO3.

8. Culture: mettre dans un incubateur à 36,5 ℃, si cultivé avec un incubateur de CO2, le bouchon doit être dévissé d'un demi - tour.

Précautions:

1. La culture peut être conservée pendant 3 - 6 mois à 4 ℃.

2. Pendant la culture cellulaire, veuillez prendre soin de maintenir l'opération stérile.

3. Pendant la culture de passage, le temps de digestion ne doit pas être trop long, sinon il affectera l'application cellulaire et son état de croissance.

4. Il est recommandé aux clients de prendre plusieurs photos de cellules par multiple pendant les 3 premiers jours suivant la réception des cellules, d'enregistrer l'état des cellules, de faciliter la communication avec le Département technique; En raison du transport, des conditions instables peuvent survenir dans les cellules sensibles individuelles, veuillez nous contacter rapidement pour nous informer de manière exhaustive des spécificités des cellules afin que nos techniciens puissent les suivre, les revoir jusqu'à ce que le problème soit résolu.

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