5637 cellules cancéreuses de la vessie humaine

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Lignée cellulaire / souche:

Cell Line: une lignée de cellules primitives (lignée de cellules) issue d'une culture primitive.

Souche cellulaire (Cell Strain): l'obtention d'une culture primaire ou d'une lignée cellulaire avec des propriétés ou des marqueurs spécifiques par sélection ou clonogenèse est appelée souche cellulaire. La nature particulière ou le logo de la souche cellulaire doit être présent tout au long de la culture. Si le passage ne peut pas être poursuivi ou si le nombre de passages est limité, appelé souche cellulaire finie (finitecell Strain); Si les passages successifs sont possibles, ils sont appelés souches cellulaires continues (Continuous Cell Strain). Pour les cellules tumorales humaines, cultivées in vitro pendant plus d'une demi - année, la croissance est stable et les générations successives peuvent être appelées souches ou lignées continues.

(i) Culture de la première génération

La culture primaire est également appelée Culture primaire, c'est - à - dire une culture effectuée pour la première fois par des cellules, des tissus et des organes prélevés directement dans le corps. Une fois qu'une cellule a été soumise à une culture de passage, elle n'est plus appelée Culture primaire mais lignée cellulaire.

Ii) lignée cellulaire

Les cultures primaires commencent les cellules après la première culture de passage, c'est - à - dire appelées lignées cellulaires. Si une lignée cellulaire a une durée de vie limitée, elle est appelée lignée cellulaire finie (Finite cell line); Les lignées cellulaires qui ont acquis une capacité de reproduction illimitée pour survivre sont appelées lignées cellulaires continues ou lignées cellulaires infinites. La plupart des lignées cellulaires infinies ont été alloploïdiées, ont un caryotype alloploïde, certaines peuvent être devenues malignes et sont donc essentiellement des lignées cellulaires qui subissent une transformation. Les lignées cellulaires infinies ont seulement la vie éternelle (ou l'immortalité), mais conservent l'inhibition de contact et la cancérogénicité sans inoculation allogénique; Certains ont non seulement la vie éternelle, mais l'inoculation allogénique est tumorigène, ce qui signifie qu'elle a été maligne. Ces deux lignées cellulaires infinies de nature différente ne sont pas non plus souvent très strictes dans l'application de ces noms dans la littérature nationale et internationale. Pour la clarté conceptuelle, ce livre est adopté pour les lignées cellulaires infinies malignes! ° lignées cellulaires transformées malignes! ± le mot indique peut - être plus approprié. Et pour les lignées cellulaires qui n'ont que la vie éternelle et ne sont pas malignes, il suffit d'utiliser des lignées cellulaires infinies ou de transformer des lignées cellulaires. Les lignées actuelles de NIH3T3, rat - 1, 10t1 / 2, etc., sont de ce type.

Opérations de culture cellulaire:

1) réanimer les cellules: le lyophilisateur contenant 1 ml de suspension cellulaire est rapidement décongelé sous agitation dans un bain - Marie à 37 ° C, plus 4 ml de milieu de culture mélangé uniformément. Centrifuger 3 min à 1000 RPM, éliminer le surnageant et bien souffler après addition de 1 - 2 ml de milieu. Toutes les suspensions cellulaires sont ensuite mises à incuber pendant une nuit dans des flacons de culture contenant la quantité appropriée de milieu (ou dans des boîtes de 6 cm, ajouter environ 4 ml de milieu et mettre à incuber pendant une nuit). Changez de liquide le lendemain et vérifiez la densité cellulaire.

2) Passage cellulaire: si la densité cellulaire atteint 80% - 90%, la culture de passage peut être effectuée. a、 Jeter le surnageant de culture et rincer les cellules 1 - 2 fois avec du PBS sans ions calcium et magnésium.

b、 Ajouter 1 ml de digestat (0,25% Trypsin - 0,53 mm EDTA) dans le flacon de culture, laisser le digestat infiltrer toutes les cellules, éliminer le digestat, placer le flacon de culture dans un incubateur à 37 ° C pour digérer pendant 1 - 3 min (selon la digestion des cellules), puis observer la digestion des Cellules sous un microscope, si la plupart des cellules arrondissent et tombent, revenir rapidement à la table d'opération, après quelques tapotements sur le flacon de culture ajouter 2 - 3 ml de milieu pour terminer la digestion. Bien mélanger doucement et charger dans un tube à centrifuger stérile, centrifuger à 1000 RPM pendant 5 min, éliminer le surnageant, ajouter 1 - 2 ml de solution de culture et bien souffler. - Oui.

c、 La suspension cellulaire est divisée dans de nouvelles boîtes contenant 8 ml de milieu ou dans des flacons à raison de 1: 2 et placée dans un incubateur.

3) lyophilisation cellulaire: la lyophilisation cellulaire peut être effectuée lorsque la croissance cellulaire est en bon état. La bouteille t25 ci - dessous à titre d'exemple;

a、 Les cellules sont collectées, chargées dans un tube de centrifugation stérile, centrifugées à 1000 tr / min pendant 4 min, le surnageant est éliminé, lavé une fois avec du PBS, le PBS est éliminé et le comptage des cellules est effectué.

b、 Ajouter le lyophilisat de cellules sans sérum selon le nombre de cellules, de sorte que la densité cellulaire 5 × 106 ~ 1 × 107 / ML, mélanger doucement, chaque lyophilisateur congeler 1 ml de suspension cellulaire, faites attention à la lyophilisation pour bien identifier.

c、 Placer le tube de congélation dans le réfrigérateur à - 80 ℃, après 24 heures, transférer à l'azote liquide pour le stockage par irrigation. Enregistrez la position de la lyophilisation pour la récupérer la prochaine fois.

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