La qualité des échantillons cellulaires est directement liée à la fiabilité et à la répétabilité des résultats expérimentaux. Shanghai cobori Bio vous présentera systématiquement les principaux points de la préparation et de la conservation des échantillons cellulaires, en fournissant aux chercheurs une référence opérationnelle normalisée, en veillant à ce que les échantillons cellulaires soient conservés dans leur état le plus Jia, en maintenant leurs propriétés biologiques et leur valeur expérimentale.
I. Étapes clés de la préparation des échantillons cellulaires
1. Préparation avant préparation
- la conception expérimentale est claire: le Protocole de préparation est déterminé en fonction des objectifs expérimentaux ultérieurs (p. ex. protéomique, transcriptomique, culture cellulaire, etc.)
- préparation des réactifs et des consommables: tous les réactifs, consommables pour les cellules en contact doivent être stériles et exempts de contamination nucléase / protéase
- pré - refroidissement de l'équipement: rotor de centrifugeuse, tube de congélation, etc. pré - refroidi à la température appropriée à l'avance
2. Collecte et traitement des cellules
- confirmation de l'état cellulaire: s'assurer que les cellules sont en phase de croissance logarithmique avec un taux de cellules vivantes > 95%
- traitement doux: évitez les bruits violents et nettoyez avec du PBS pré - refroidi ou de la saumure physiologique
- traitement en temps opportun: traiter dès que possible après le retrait de l'incubateur, réduire la réponse au stress cellulaire
3. Exigences de traitement spéciales
- Échantillon d'analyse de protéine: ajouter un mélange d'inhibiteurs de protéase pour éviter la congélation et la dégel répétées
- Échantillons d'analyse d'acides nucléiques: utilisation de consommables sans RNase / DNase, ajout d'un protecteur d'ARN
- Échantillons métabolomiques: activité métabolique de trempe rapide avec méthanol pré - refroidi ou liquide de trempe spécial
II. Méthodes de préservation cellulaire et sélection
1. Conservation à court terme (< 24 heures)
- conservation à 4°C: suspension en milieu Quan fini ou en tampon
- cas d'application: expériences de cytométrie en flux, imagerie de cellules vivantes, etc. réalisées le jour même
- précautions: éviter la contamination bactérienne, conservation scellée
2. Conservation à moyen terme (1 semaine - 1 mois)
- - 80 ℃ Conservation: ajouter un protecteur approprié de stockage de gel
- liquide de congélation recommandé:
- culture cellulaire: sérum de veau foetal à 10% de DMSO
- analyse des protéines: lysat avec inhibiteur de protéase
- analyse des acides nucléiques: réactifs de protection de l'ARN (par exemple trizol ou solution de conservation dédiée)
3. Conservation à long terme (> 1 mois)
- préservation de l'azote liquide (- 196°c): la méthode la plus Jia pour maintenir l'activité cellulaire
- procédure de congélation:
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1. Programme de refroidissement: 4 ℃ 30 minutes → - 20 ℃ 2 heures → - 80 ℃ pendant la nuit
2. Transfert à la phase gazeuse d'azote liquide (- 150 ℃) pour la conservation à long terme
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- sélection des lyophilisateurs: informations sur les cellules étiquetées, date de lyophilisation, nombre de passages, opérateur
Iii. Points clés du contrôle de la qualité
1. Détection de l'activité cellulaire
- teinture au bleu Trypan ou détection MTT avant et après congélation
- l'activité cellulaire après réanimation doit être > 80% (idéalement > 90%)
2. Contrôle de la pollution
- détection régulière de la contamination par mycoplasmes
- contamination bactérienne, fongique observation à l'oeil nu et Microscopie
- identification Str de contamination croisée cellulaire
3. Marquage et enregistrement
- système de gestion de codes QR ou de codes à barres
- enregistrement détaillé de l'origine cellulaire, du processus de traitement, de l'emplacement de conservation
Iv. Solutions aux problèmes courants
| problèmes | Causes possibles | solutions |
| faible activité cellulaire après réanimation | le processus de congélation refroidit trop rapidement | utilisez une boîte de refroidissement programmatique |
| dégradation des protéines | insuffisance des inhibiteurs de protéase | ajout de plusieurs mélanges d'inhibiteurs de protéase |
| dégradation de l'ARN | contamination RNase pendant l'opération | utilisation de consommables sans RNase, traitement rapide |
| contamination par Mycoplasma | contamination des cellules primaires ou manipulation | détection régulière, utilisation de Mycoplasma Remover |
V. Considérations de sécurité
1. Biosécurité: se conformer aux exigences de niveau de biosécurité correspondantes en fonction de l'origine cellulaire
2. Opération d'azote liquide: porter un masque protecteur et des gants pour éviter les engelures
3. Sécurité chimique: les réactifs tels que DMSO sont bien traités pour éviter le contact direct avec la peau
4. Traitement des déchets: les déchets cellulaires sont traités conformément au processus de traitement des matières biologiques dangereuses
Vi. Résumé des programmes de conservation recommandés
| direction d'application | méthode de conservation recommandée | température de conservation | durée de conservation prévue |
| culture de réanimation cellulaire | DMSO + sérum lyophilisé | azote liquide | plus de 10 ans |
| Western Blot | lysat Ripa | - 80 °C | 1 an |
| extraction d'ARN | trizol ou protecteur d'ARN | - 80 °C | 6 mois |
| Metabolomics | extinction au méthanol à 80% | - 80 °C | 3 mois |
| cytométrie de flux | PBS avec 2% de FBS | 4 °C | 24 heures |
Vii. Système de gestion intelligent
Il est recommandé que le laboratoire établisse un système électronique de gestion des échantillons cellulaires contenant:
- suivi en temps réel de l'emplacement de l'échantillon
- mise à jour automatique des enregistrements de stockage / retrait par congélation
- contrôles et rappels périodiques des stocks
- récupération rapide des informations d'échantillon

Des échantillons cellulaires de haute qualité sont la pierre angulaire du succès expérimental. L'intégrité biologique de l'échantillon cellulaire peut être maintenue dans les limites maximales grâce à des processus de préparation normalisés et à des méthodes de conservation scientifiques. Avec le développement de nouvelles techniques telles que l'analyse unicellulaire, la transcriptomique spatiale, etc., les exigences en matière de qualité des échantillons cellulaires seront encore améliorées. L'établissement de normes rigoureuses de gestion des échantillons est non seulement une nécessité de garantir la fiabilité des expériences actuelles, mais aussi un investissement stratégique pour préserver les précieuses ressources biologiques pour la recherche future.