DansKit ELISA pour cellules humainesParmi eux, il est important de choisir diverses conditions expérimentales, notamment:

　　

1, choix du support solide: de nombreuses substances peuvent être utilisées comme support solide, comme le polychlorure de vinyle, le polystyrène, le polyacrylamide, la cellulose, etc. La forme peut être une plaque concave, un tube à essai, des perles, etc. Actuellement, les plaques concaves en polystyrène à 40 trous sont couramment utilisées. Quel que soit le support, le criblage peut être effectué avant utilisation: les paquets sont soumis à des quantités égales d'antigènes, réagissent dans les mêmes conditions expérimentales, observent si la réaction de rendu des couleurs est homogène, jugent si ses propriétés d'adsorption sont bonnes.

　　

2, le paquet est choisi par l'anticorps (ou l'antigène): lorsque l'anticorps (ou l'antigène) est adsorbé sur la surface du support solide, la pureté est requise, généralement le pH est entre 9,0 ~ 9,6. La température d'adsorption, le temps et la quantité de protéines ont également une certaine influence. Généralement 4 ℃ utilisé pendant 18 - 24 heures. Il est nécessaire de titrer des concentrations appropriées de package de protéines: C'est - à - dire différentes concentrations de protéines (0,1, 1,0 et 10 µg / ML, etc.), les valeurs de do des échantillons positifs étant observées lorsque les autres conditions d'essai sont identiques. Choisissez une concentration avec une valeur d'od zui grande et une quantité de protéine zui petite. Pour la plupart des protéines, il est généralement de 1 à 10 μg / ML.

　　

3, sélection de la concentration de travail de l'anticorps étalon enzymatique: le titre initial est d'abord titré avec la méthode ELISA Direct Human Cell ELISA Kit (voir la section anticorps étalon enzymatique). Les autres conditions sont ensuite fixées ou la concentration de travail est titrée avec précision dans le système expérimental formel en utilisant la « méthode de la matrice carrée» (revêtement, échantillon de référence de l'échantillon à tester et anticorps étalon enzymatique à différentes dilutions).

　　

4, Substrat enzymatique et choix du donneur d'hydrogène: le choix du donneur d'hydrogène nécessite une réaction de rendu des couleurs peu coûteuse, sûre et évidente, incolore. Certains donneurs d'hydrogène (tels que les OPD, etc.) sont potentiellement cancérigènes et devraient être protégés. Si les conditions le permettent, il convient d'utiliser des donneurs d'hydrogène non cancérogènes et très sensibles, tels que le TMB et l'abts, qui sont actuellement des donneurs d'hydrogène plus satisfaisants. Après un certain temps d'action du substrat, la réaction doit être terminée par l'ajout d'un acide fort ou d'une base forte. Le temps d'action général du substrat doit être de 10 à 30 minutes. La solution de substrat doit être fraîchement formulée, notamment par addition d'h 2 O 2 avant utilisation.