Principe de congélation: le principe d'activation des cellules congelées est une décongélation rapide pour éviter que les cristaux de glace ne se recristallisent et ne causent des dommages aux cellules, entraînant leur mort. Après activation cellulaire, cela prend environ quelques jours, ou une à deux générations de suite. Sa croissance cellulaire ou ses propriétés reviennent à la normale(par exemple, la production d'anticorps monosouches ou d'autres protéines).

UnLes étapes opérationnelles:

① les opérateurs doivent porter des masques de protection et des gants pour éviter les dommages causés par l'éclatement du tube de congélation.

② retirez le tube de congélation du récipient d'azote liquide ou de glace sèche, vérifiez si le couvercle est serré, en raison du processus de dilatation thermique et de rétrécissement à froid, le couvercle est facile à desserrer à ce moment - là.

③ le milieu frais est placé dans un évier à 37 ° C et réchauffé, après quoi il est pulvérisé à 70% d'alcool et essoré, transféré dans une table d'opération stérile.

④ retirez le tube de congélation, mettez - le immédiatement dans un évier à 37 ° C pour décongeler rapidement, agitez doucement le tube de congélation pour qu'il fonde tout en 1 minute, essuyez l'extérieur du tube de conservation à 70% Ethanol, déplacez - le à l'intérieur de la table d'opération stérile.

⑤ retirez 0,9 ml de la suspension cellulaire décongelée, ajoutez lentement dans le récipient de culture avec le milieu de culture (rapport de dilution de 1: 10 à 1: 15), mélangez bien et mettez dans l'incubateur de CO2 pour la culture. On prélève également 0,1 ml de suspension cellulaire décongelée pour le test de survie.

⑥ Après décongélation si l'agent de cryoprotection (par exemple, DMSO ou Glycerol) est éliminé immédiatement varie selon l'espèce cellulaire, en général, la plupart ne nécessitent pas d'élimination immédiate de l'agent de cryoprotection. Cependant, pour l'élimination immédiate, ajouter la suspension cellulaire décongelée à l'intérieur d'un tube de centrifugation contenant 5 - 10 ml de milieu, centrifuger 1000 RPM pendant 5 minutes, enlever le surnageant, ajouter le milieu frais, bien mélanger et mettre en culture dans un incubateur de CO2.

⑦ s'il n'est pas nécessaire d'enlever immédiatement le cryoconservateur, remplacer le milieu de culture tous les deux jours après la décongélation de la culture.

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