1.2.1Structure des anticorps

Les anticorps sont des immunoglobulines capables de se lier spécifiquement à un antigène(immunoglobuline, Ig)- Oui.IgEn cinq catégories, à savoirIgGEt,IgAEt,IgMEt,IgDetIgE. relatives aux immunoessaisIgPrincipalement pourIgGetIgM- Oui.IgPar deux chaînes légères (L), et deux chaînes lourdes (H) de composition monomérique.IgLa chaîne légère est la même, il y aκ(kappa) etλ(Lambda), deux types. Cinq catégoriesIgLa structure des chaînes lourdes est différente, ce qui détermine leur antigénicité.IgGetIgMLes chaînes lourdes sont respectivement appeléesγ(gamma) chaîne etμ(mu), la chaîne.

Chaînes lourdes et chaînes légèresNL'ordre d'arrangement des acides aminés aux extrémités varie selon les différents anticorps, appelés régions variables, respectivementVHetVLReprésenté. Les deux constituent le site de liaison antigénique de l'anticorps, uniquement avec le déterminant antigénique correspondantCoordination, la liaison spécifique se produit, est la base structurelle de l'antigène de liaison unique de l'anticorps.

IgGPeut être décomposé par la papaïne en trois segments, dont deux identiques sont appelés fragments de liaison à l'antigène (Fab). ChaqueFabTous conservent la capacité de lier les antigènes, mais un seulSite de liaison à l'antigène, monovalent, sans agglutination ni précipitation après liaison à l'antigène. Un autre secteur ditFcSegment, sans activité anticorps, mais avecIgG* antigénicité.

IgGPeut être décomposé par la pepsine en deux fragments, unFabDouble corps, ditF(ab') et2, peut se lier à deux antigènes identiques; Un autre fragment similaireFc, puis décomposéEn petites molécules de Polypeptides, sans activité biologique.

IgMEst un pentamère constitué de cinq monomères contenant 10Une chaîne lourde et10Une chaîne légère, avec10La Valence de liaison d'un antigène, due à l'influence de la position spatiale, ne se manifeste que par cinq Valence de liaison d'antigène.IgMLe poids moléculaire est d'environ900000,IgGLe poids moléculaire est d'environ150000- Oui.

Après que l'organisme soit infecté par des micro - organismes, il produit d'abordIgMAnticorps, puis produitIgGAnticorps. Après un certain temps,IgMLa quantité d'anticorps diminue progressivement et disparaît, tandis queIgGLes anticorps peuvent persister longtemps et durer plusieurs années après la maladie *Longue.

IgMLes anticorps sont généralement protecteurs les anticorps sont immunologiques. doncIgMLa détermination des anticorps a une valeur diagnostique clinique élevée pour certaines maladies infectieuses telles que l'hépatite A. La photo de droite est l'hépatite ADans le sérum du patientIgGAnticorps etIgMLe moment et le niveau d'apparition des anticorps.

1.3Réaction antigène - anticorps

1.3.1可逆性

Le processus par lequel un antigène se lie à un anticorps pour former un complexe antigène - anticorps est un équilibre dynamique dont la réponse est:

Ag+AbAg·Ab

Affinité des anticorps (Affinité), est la force de liaison intrinsèque entre les anticorps antigéniques, peut être utilisé avec des constantes d'équilibreKReprésente:

K=[Ag·Ab]/[Ag] [Ab]

Ag·AbLe degré de dissociation etKLes valeurs sont liées. Le point de liaison de l'antigène de l'anticorps de haute affinité avec le déterminant de l'antigène est bien adapté à la configuration spatiale, les deux se liant fermement et ne se dissociant pas facilement. DissociationCes derniers antigènes ou anticorps conservent leur structure et leur activité d'origine et peuvent donc être purifiés par chromatographie d'affinité. Dans l'antisérum, spécifiqueIgGLes anticorps ne représentent que le totalIgGAu milieuLa très petite partie. Des anticorps spécifiques extraits par chromatographie d'affinité, appelés anticorps purs par chromatographie d'affinité, appliqués à des immunoessais donnent de meilleurs résultats.

1.3.2Zui proportion appropriée

La quantité de complexe anticorps (précipité) formé par l'ajout d'un incrément d'antigène à une quantité constante d'anticorps est représentée sur la figure1 à 4. La partie culminante de la courbe est la plage appropriée pour la proportion d'anticorps antigéniques Zui, appelée bande d'équivalence (zone d'équivalence). Avant et après la bande équivalente sont respectivement la bande d'excès d'anticorps et la bande d'excès d'antigène. S'il y a un excès extrême d'antigène ou d'anticorps, aucun précipité ne se forme, dans un essai immunologiquePhénomène appelé ceinture (phénomène zone). L'excès d'anticorps est appelé bande frontale (présone), l'excès antigénique est appelé bande arrière (postzone). Détermination de l'anti - immunologieAu départ, une quantité suffisante d'anticorps doit être présente dans le système réactionnel, sinon la quantité mesurée sera inférieure au contenu réel ou même un faux négatif apparaîtra.

1.3.3Spécificité

La liaison de l'antigène - anticorps ne se produit essentiellement qu'entre le déterminant antigénique de l'antigène et le site de liaison antigénique de l'anticorps. Puisque les deux sont complémentaires dans la structure chimique et la configuration spatiale, l'antigèneLa réaction anticorps est hautement spécifique. Par exemple, antigènes de surface dans le virus de l'hépatite B (HBsAg),eAntigènes (HBeAg), et les anticorps Core (HBcAg), provenant du même virus mais se liant uniquement à ses anticorps correspondents et non à deux autres anticorpsLa réaction. Cette spécificité de la réaction antigène - anticorps permet à l'immunodosage de déterminer une substance spécifique dans un composé protéique très complexe, par example le sérum, sans isoler au préalable la substance à tester.- Oui.

Mais cette spécificité non plus. En supposant que les deux composés aient en partie la même structure, des réactions croisées peuvent apparaître dans la réaction antigène - anticorps. Par exemple: gonadotrophine chorionique (hCG), et l'hormone lutéinisante (LH), toutes deux réalisées parαetbêtaComposition de deux sous - unités, différentes dans leur structurebêtaSous - unités, tandis que les deuxαLes sous - unités sont similaires. UtiliserhCGImmunitéAntisérum obtenu par les animaux contenant des antiα-hCGEt antibêta-hCGDeux anticorps, antiα-hCGLes anticorps serontLHParmi les
αUne réaction croisée se produit au niveau de l'enzyme. Dans l'examen clinique, comme l'antihCGAntisérum comme réactif de diagnostic de grossesse pour détecter dans l'urinehCG, ne peut être utilisé que pourhCGEssais à concentration plus élevée, sinonTraces d'excrétion physiologique dans l'urine chez les femmesLHUne réaction croisée se produira avec elle. Par conséquent, en tant que diagnostic de grossesse précoce (la sensibilité devrait atteindre50 mIu/mlhCG) dans la pratique doitL'application n'est que pourhCGRésistance spécifiquebêta-hCGPour éviter les réactions croisées avec d'autres hormones.

1.3.4Sensibilité

Lors de la détermination de la teneur d'une substance dans le sérum, la sensibilité de la méthode colorimétrique chimique estmg/mlNiveau, la sensibilité de l'essai de réaction enzymatique est d'environ5 ~ 10μg / mlLa sensibilité de la méthode de diffusion du gel et de la méthode de turbidité dans les essais immunologiques est similaire à celle de la méthode de réaction enzymatique. Exemption du marquageLa sensibilité de l'essai de peste peut être augmentée des milliers de fois, jusqu'àng/mlNiveau. Par example, déterminé par radioimmunodosage ou immunodosage enzymatiqueHBsAgSa sensibilité peut atteindre0,1 ng / ml- Oui.

1.4Application des immunoessais à l'examen clinique

Étant donné que divers composants antigéniques, y compris les haptènes de petites molécules, peuvent être utilisés pour préparer des antisérums spécifiques ou des anticorps monoclonaux, l'utilisation de cet anticorps comme réactif permet de détecter l'antigène correspondant dans l'échantillon.Par conséquent, le champ d'application de l'immunodosage est extrêmement large et peut être utilisé dans l'examen clinique pour déterminer:

1)Diverses protéines dans les fluides corporels, y compris des protéines en très petites quantités telles que l'alpha - foetoprotéine, etc.

2)Hormones, y compris les hormones stéroïdiennes de petit poids moléculaire, etc.

3)Antibiotiques et médicaments.

4)Antigènes pathogènes,HBsAgEt,HBeAgAttendez.

5)En outre, des antigènes purifiés peuvent également être utilisés pour détecter les anticorps dans les spécimens, tels que les anticorpsHBsAttendez.

5. immunodosage du marquage

Comme indiqué ci - dessus, l'immunodosage est une méthode de dosage sensible, la précipitation ou la turbidité formée est déterminée directement après la réaction antigène - anticorps, la sensibilité peut atteindre5 ~ 10μg / mlMais dans l'examen clinique, certaines substances à mesurer sont présentes à des niveaux bien inférieurs à ce niveau dans le spécimen, il est donc important de rechercher des moyens d'augmenter la sensibilité. L'immunodosage du marquage estL'antigène ou l'anticorps dans le réactif de détection est marqué avec une substance qui peut être microdosée, en augmentant la sensibilité par la détermination du marqueur. Dans les essais radio - immunologiques et enzymatiques, les marqueurs sont respectivementPour les radionucléides et les enzymes, zui est utilisé après la détermination de la radioactivité et de la viabilité enzymatique pour calculer la quantité de produit à examiner, la sensibilité peut être améliorée de plusieurs centaines à plusieurs milliers de fois par rapport à la détermination directe du précipité. Dans un essai immunologique marqué,Un excès de réactif de marquage est généralement ajouté pour garantir la réaction avec le réactif à mesurer *. Pour marquer les anticorps (Ab^※) Détection des antigènes (Ag), à titre d'exemple, la réaction est la suivante:

Ag + Ab^※ AgAb^※+ Ab^※

Dans les produits de réaction, il y aAgCombinéAb^※Et libre etAb^※ Si un marqueur est déterminé sans séparer les deux, le résultat mesuré sera la somme des deux. La séparation du marqueur libre du marqueur de liaison est donc une étape importante dans les immunoessais de marquage. RécupérablePar de nombreux moyens, le support en phase solide est l'un d'entre eux. Si l'antigène ou l'anticorps est encapsulé sur un support en phase solide, puis réagit directement avec l'antigène ou l'anticorps marqué, le marqueur lié est fixé sur le supportSur le corps, tandis que les marqueurs libres restent dans la solution. On peut ainsi laisser libre par lavageAb^※L'élimination, la détermination du marqueur de liaison peut être effectuée en phase solide.

6. immunodosage enzymatique

Immunodosage enzymatique (enzyme immunoassay) peut être divisé en phase homogène (homogène), et hétérogènes (hétérogène), deux types. En phase homogèneEIEMoyenne disponibleIl n'est pas nécessaire de procéder à la séparation des marqueurs libres et liés pour déterminer directement les marqueurs. Par exemple, dans certaines conditions, l'enzyme formée après la réaction de l'anticorps antigénique marque la perte de l'enzyme dans le complexe antigène - anticorpsSa vitalité sur l'action du substrat, de sorte que la vitalité enzymatique mesurée reflète directement le marqueur enzymatique libre. Toutes phasesEIEMoins d'applications dans l'examen clinique. Phase hétérogèneEIEIl faut d'abord être libre etSéparation des marqueurs liés. Comme indiqué précédemment, le support en phase solide peut être utilisé comme moyen de séparation. Cette méthode d'immunodosage enzymatique en phase solide1971Appelé immunosorbant enzymatique lors de l'établissement du début de l'an zuiDétermination (Assay immunosorbent lié à des enzymes), abrégéELISADans le pays, il est traduit comme un test d'immunoadsorption enzymatique, bien que la signification n'est pas * précise, mais a été utilisé.