ELISA(enzyme - linked immunosorption test) est une méthode de détection immunologique de haute sensibilité largement utilisée dans la recherche biomédicale et le diagnostic clinique. Malgré sa forte spécificité, des résultats faussement négatifs peuvent encore se produire dans la pratique, c'est - à - dire que la présence réelle de la substance cible dans l'échantillon n'a pas été détectée. Cela affecte non seulement la précision des données expérimentales, mais peut également conduire à des jugements scientifiques ou cliniques erronés. Analyse combinée, le problème des faux négatifs découle principalement des trois aspects suivants.

Analyse de la classification des facteurs d'influence

I. facteurs de l'échantillon

Effets de la période de fenêtre: après infection2 - 3Une concentration insuffisante d'anticorps au cours de la semaine peut entraîner un faux négatif.

Manipulation incorrecte de l'échantillon:

Destruction répétée de la structure de l'anticorps par Gel - dégel;

Hémolyse, hyperlipides ou contamination bactérienne interférant avec la détection;

Utilisation de l'héparine/ EDTALes isoanticoagulants inhibent l'activité enzymatique.

Deux,Facteurs liés aux réactifs

La qualité et l'adéquation des réactifs sont des conditions préalables pour garantir l'exactitude de la détection.

1、Problèmes de qualité des réactifs: utilisation sans cote, expiration ou Conservation incorrecte (si non4℃ réfrigéré) des réactifs qui peuvent provoquer une diminution de la sensibilité.

2、Réaction croisée des réactifs: certains mutants (tels queHBVdeSMutations génétiques) peuvent modifier l'épitope de l'antigène, de sorte que les anticorps dans les kits commerciaux ne peuvent pas être reconnus efficacement, ce qui entraîne des tests manqués.

3、Interférence médicamenteuse: immunoglobulines de l'hépatite B hautement rentables chez le patient (HBIG) peut être associée àHBsAgFormer un complexe qui empêche sa détection- Oui.

Iii. Facteurs liés au fonctionnement

Les processus opérationnels normalisés sont la clé pour obtenir des résultats fiables.

1、Problèmes de dosage: un dosage insuffisant, un dosage trop long (en particulier pour les échantillons faiblement positifs) ou une pipette inadéquate peuvent entraîner un signal faible.

2、Conditions d'incubation: température d'incubation (généralement37℃) et le temps n'est pas strictement contrôlé, affectera l'efficacité de liaison antigène - anticorps.

3、Problèmes de lavage des plaques: laver les plaques trop souvent ou trop fort peut entraîner la perte de complexes immunitaires déjà liés.

4、Rendu et interprétation des couleurs: le temps de rendu des couleurs est trop court, les échantillons de faible titre peuvent ne pas être aussi clairs; Ne pas utiliser une lecture à double longueur d'onde peut augmenter l'interférence de fond, ce qui entraîne un faible positif étant mal évalué comme négatif - Oui.

Iv. Perturbations endogènes

Des substances non spécifiques telles que les facteurs rhumatoïdes, les compléments, etc., se lient aux anticorps, entraînant des faux positifs ou des faux négatifs;

Les patients immunodéprimés (par exemple, le sida) ont une production insuffisante d'anticorps.

V. Autres raisons

Les mutations génétiques affectent les sites de liaison des anticorps;

Limites des méthodes de détection (p. ex.ELISASensibilité insuffisante)

conseil

Pour éviterELISAFaux négatif, les mesures suivantes sont recommandées:

1、Pour les échantillons suspects fortement positifs, une dilution de gradient suivie d'une retection est effectuée pour exclure l'effet crochet.

2、Les kits de méthode en deux étapes sont préférés car ils ne sont pas sensibles à l'effet crochet.

3、Suivez strictement les instructions pour assurer l'équilibre des réactifs, le temps d'incubation et la normalisation des procédures de lavage des plaques.

4、Pour les résultats critiques ou négatifs, mais cliniquement hautement suspects, il convient de les combiner avec d'autres méthodes de détection (p. ex.la PCR) pour révision.

En comprenant ces facteurs et en prenant les précautions correspondantes, il est possible de réduireELISARésultats faussement négatifs dans l'expérience.