Ce kit ne doit être utilisé que pour la recherche scientifique et ne doit pas être utilisé pour le diagnostic médical

Souris(Souris) etFragment 3B du complément du facteur I (ic3b)Kits de détection ELISA

Mode d'emploi

Principe de détection

Le kit utilise le test d'immunoadsorption enzymatique (ELISA) par la méthode sandwich en une étape à double corps kàng. Les paquets qui ont été pré - emballés par le fragment de complément de facteur I 3b (ic3b) kàng ont été microporeux, puis les spécimens, les étalons, les corps de détection marqués HRP kàng ont été ajoutés à leur tour, incubés et lavés à la couche. La couleur est révélée avec le substrat TMB qui se transforme en bleu sous la catalyse de la peroxydase et en jaune final sous l'action de l'acide. La nuance de couleur et le fragment 3B du complément du facteur I (ic3b) dans l'échantillon étaient positivement corrélés. La concentration de l'échantillon a été calculée en déterminant l'Absorbance (valeur OD) à une longueur d'onde de 450 nm à l'aide d'un étalon enzymatique.

Méthodes de collecte, de traitement et de conservation des échantillons

1. Sérum: utilisez un tube à essai sans pyrogène et endotoxine, évitez toute irritation cellulaire pendant l'opération, après la collecte du sang, le sérum et les globules rouges sont rapidement et soigneusement séparés par centrifugation à 3000 tours pendant 10 minutes.

2. Plasma: EDTA, Citrate ou héparine anticoagulant. Centrifuger à 3000 tours pendant 30 minutes.

3. Surnageant cellulaire: 3000 tours de centrifugation pendant 10 minutes pour éliminer les particules et les polymères.

4. Homogénat tissulaire: mélanger les tissus avec la bonne quantité de solution saline physiologique. Centrifuger à 3000 tours pendant 10 minutes pour enlever le limpide.

5. Conservation: si l'échantillon n'est pas détecté à temps après la collecte, s'il vous plaît diviser l'ensemble selon une dose unique, conserver la congélation à - 20 ℃, éviter la congélation et la dégel répétées, décongeler à température ambiante et s'assurer que l'échantillon est uniformément plein et dégelé.

Articles autonomes

1. étalon enzymatique (450nm)

2. échantillonneur de haute précision et tête de pistolet: 0,5 - 10ul, 2 - 20ul, 20 - 200ul, 200 - 1000ul

3. Boîte de température constante de 37 ℃

Précautions opérationnelles

1. Le kit est conservé à 2 - 8 ℃, utilisez la température de la Chambre avant pour équilibrer pendant 20 minutes. Le liquide de lavage concentré retiré du réfrigérateur aura une cristallisation, ce qui appartient au phénomène normal, le chauffage du bain - Marie rend le wán cristallin complètement dissous et réutilisé.

2. Les lattes qui ne sont pas utilisées dans l'expérience doivent être immédiatement remises dans le sac auto - scellé, scellé (séchage à basse température) pour la conservation.

3. Un étalon s0 de concentration 0 peut être considéré comme un témoin négatif ou vide; En suivant les instructions, l'échantillon a été dilué 5 fois et le résultat final multiplié par 5 est la concentration réelle de l'échantillon.

4. L'opération d'incubation est effectuée strictement selon le temps, la quantité de liquide et l'ordre indiqués dans les instructions.

5. Bien agiter tous les composants liquides avant utilisation.

Composition du kit

Note: les concentrations des étalons (s0 - S5) sont dans l'ordre: 0, 12,5, 25, 50, 100, 200 ng / ml

Préparation des réactifs

Dilution du tampon de lavage 20x: l'eau distillée est diluée à 1: 20, soit 1 partie de tampon de lavage 20x plus 19 parties d'eau distillée.

Méthode de lavage de plaques

1. Laver la plaque à la main: vider le liquide à l'intérieur du trou, remplir chaque trou avec du liquide de lavage, laisser reposer 1 min et vider le liquide à l'intérieur du trou, sécher sur le papier absorbant, laver la plaque 5 fois.

2. Machine automatique de lavage de plaque: 350 μl de lotion d'injection par puits, immersion 1min, laver la plaque 5 fois.

Étapes opérationnelles

1. Retirez les lattes nécessaires du sac de papier d'aluminium après 20 min d'équilibre de la température ambiante, les lattes restantes sont remises à 4 ° C hermétiquement avec un sac auto - scellé.

2. Placez le trou standard et le trou d'échantillon, chaque trou standard plus 50 μl de standard avec différentes concentrations;

3. Puits d'échantillon d'abord ajouter l'échantillon à tester 10 μl, puis la dilution de l'échantillon 40 μl; Les trous vides ne sont pas ajoutés.

4. À l'exception des puits vides, chaque puits dans les puits standard et les puits d'échantillon ont été ajoutés à la peroxydase de raifort marquée (HRP) pour détecter le corps kàng 100 μl, les puits de réaction ont été scellés avec une membrane de plaque d'étanchéité, 37 ℃ bain d'eau pot ou incuber dans un incubateur pendant 60 min.

5. Vider le liquide, le papier absorbant pour sécher, chaque trou est rempli de liquide de lavage, laisser reposer 1 min, jeter le liquide de lavage, le papier absorbant pour sécher, ainsi répéter le lavage de la plaque 5 fois (peut également laver la plaque à la machine).

6. Ajouter les substrats a, B 50 μl chacun par puits, 37 ℃ incuber à l'abri de la lumière pendant 15 min.

7. Ajouter 50 μl de liquide de terminaison par puits pendant 15 min, la valeur de do de chaque puits est déterminée à une longueur d'onde de 450 nm.

Jugement des résultats

Dessiner une courbe Standard: dans une feuille de calcul Excel, en abscisse pour la concentration standard et en ordonnée pour la valeur od correspondante, Dessinez une courbe de régression linéaire standard, en calculant les valeurs de concentration de chaque échantillon par équation de courbe.

Performance du kit

1. Précision: régression linéaire du produit standard avec la valeur du coefficient de corrélation de la concentration attendue R, supérieure ou égale à 09900.

2. Sensibilité: zuì faible concentration de détection inférieure à 1,0 ng / ML.

Spécificité: pas de réaction croisée avec d'autres analogues structuraux solubles.

4. Répétabilité: le coefficient de variation intra - plaque et inter - plaque est inférieur à 15%.

5. Stockage: 2 - 8 ℃, protection contre la lumière et l'humidité.

6. Validité: 6 mois

Disclaimer

1. Le kit est pour l'usage de la recherche seulement, ne doit pas être utilisé dans des expériences cliniques ou des expériences humaines, sinon toutes les conséquences qui en découlent, sont à la charge de l'expérimentateur et la société n'est pas responsable.

2. Strictement selon les instructions, l'expérimentateur enfreint les instructions, les conséquences sont à la charge de l'expérimentateur.