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L'efficacité de l'utilisation des instruments de détection de la peste porcine africaine dépend en grande partie de la nature normative de l'opération. Bien qu'il existe des différences dans le processus de fonctionnement des différents types d'instruments, mais le noyau tourne autour de « traitement de l'échantillon - opération de détection - interprétation des résultats» trois maillons de base, chaque étape du contrôle des détails affecte directement la précision des résultats de détection, les opérations novices nécessitent une attention particulière.

Préparation avant utilisation. Tout d'abord, vérifiez l'état de l'équipement, Confirmez que la connexion d'alimentation est stable, le trou de dissipation de chaleur n'est pas obstrué, l'instrument PCR quantitatif Fluorescent doit être allumé et préchauffé 30 minutes à l'avance pour assurer la stabilité du système de contrôle de la température; L'instrument de détection rapide de l'or colloïdal doit placer l'équipement et les réactifs dans l'environnement de température ambiante (20 - 25 ℃) à l'avance pour éviter que la température trop basse affecte l'effet de réaction. Dans le même temps, pour préparer des outils de collecte d'échantillons spéciaux, des gants jetables, etc., faites une protection individuelle tout en empêchant la contamination croisée des échantillons. La préparation du réactif doit suivre strictement les instructions, décongeler lentement les amorces, les sondes et autres réactifs congelés dans un bain de glace, mélanger doucement à l'envers Après décongélation, éviter une commotion violente pour perturber l'activité du réactif.

En prenant l'instrument de détection PCR quantitative par fluorescence du courant principal comme exemple, les étapes de fonctionnement de base peuvent être divisées en quatre étapes. C'est la collecte et le traitement des échantillons, qui sont la base de la détection. Il est nécessaire de choisir le type d'échantillon approprié en fonction de l'objectif du test, les porcs vivants sont prioritaires pour la collecte de sang anticoagulant, les porcs morts et malades sont sélectionnés pour la rate, les ganglions lymphatiques et d'autres tissus riches en virus. L'échantillon après le prélèvement est traité avec un lysat spécial pour extraire les acides nucléiques par centrifugation, adsorption, élution, etc., le processus nécessite un contrôle strict de la vitesse de centrifugation (généralement 12 000 tr / min) et du temps (3 - 5 minutes), assurer la pureté de l'extraction des acides nucléiques et éviter que les impuretés telles que les protéines interfèrent avec les tests ultérieurs.

La deuxième étape est la formulation du système réactionnel, qui est la clé pour garantir la précision de la détection. À l'intérieur de la table d'opération stérile, le gabarit d'acide nucléique extrait, le liquide réactionnel PCR, la préparation enzymatique sont ajoutés dans le tube de réaction à son tour proportionnellement, chaque étape doit utiliser une nouvelle tête d'aspiration de pipette pour éviter la contamination croisée. Une fois la formulation du système terminée, vous devez appuyer doucement sur le fond du tube de réaction pour mélanger le liquide, centrifuger pendant quelques secondes supplémentaires pour éliminer les bulles d'air et éviter que les bulles d'air affectent l'acquisition du signal de fluorescence.

La troisième étape est la détection et la configuration du programme. Placez le tube de réaction à l'intérieur de la fente d'échantillonnage de l'instrument, en notant que le numéro correspond sans erreur aux informations de l'échantillon. Le programme de détection est réglé selon la description du réactif, comprenant les étapes de pré - dénaturation (95°c, 30 secondes), dénaturation (95°c, 5 secondes), extension du recuit (60°C, 30 secondes), etc., le nombre de cycles étant typiquement de 40, tandis que le canal Fluorescent correspondent (tel que Le canal fam) est sélectionné. La détection démarre une fois la configuration du programme terminée, évitez de toucher l'instrument pendant le processus et empêchez le déplacement de la fente d'échantillon de provoquer l'échec de la détection.

La quatrième étape est la lecture et l'enregistrement des résultats. Après la fin de la détection, l'instrument génère automatiquement la courbe d'amplification et la valeur CT, les critères de jugement doivent suivre strictement les exigences du réactif: valeur CT ≤ 37 et la courbe d'amplification est généralement positive de type "s"; Une valeur CT > 37 ou une courbe sans amplification négative; En cas de courbe atypique, une nouvelle confirmation de détection est requise. Une fois la détection terminée, exportez les données en temps opportun, faites un enregistrement des informations sur l'échantillon, du temps de détection, de l'état de l'instrument, etc., pour faciliter la traçabilité ultérieure.

Le fonctionnement de l'instrument de détection rapide de l'or colloïdal est plus facile et convient au dépistage rapide à la base. Après le traitement de l'échantillon, aspirer la bonne quantité de gouttelettes de l'échantillon avec une paille pour l'ajouter dans le trou d'échantillonnage de la bande de papier à essai, la quantité de gouttelettes est contrôlée à 3 - 4 gouttelettes, ce qui évite le débordement de liquide causé par un excès. Observation des résultats après 15 - 20 minutes de repos: la ligne de contrôle de la qualité et la ligne de détection sont positives en même temps; Seul le rendu de couleur de la ligne de contrôle de qualité est négatif; Aucun rendu de couleur de ligne de contrôle de qualité, alors la détection est invalide, la bande de test doit être remplacée pour être re - détectée. Après utilisation, les bandelettes d'essai et les récipients d'échantillon utilisés doivent être éliminés conformément aux spécifications relatives aux déchets médicaux pour éviter la propagation du virus.